[发明专利]一种从紫花苜蓿干草中制备纯多糖的方法有效
| 申请号： | 201110094138.9 | 申请日： | 2011-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN102212144A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 朱宇旌;张勇;王翀 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C08B37/00 | 分类号： | C08B37/00;A23L1/09;A23K1/16 |
| 代理公司： | 沈阳科威专利代理有限责任公司 21101 | 代理人： | 张述学 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 紫花苜蓿 干草 制备 多糖 方法 | ||
1.一种从紫花苜蓿干草中制备纯多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）、将风干或烘干的苜蓿草粉碎，过60目筛，加入20-35倍于草粉重量20-40℃的温水浸泡30min；
（2）、置于超声波提取器中，将温度升高到70-80℃，以后保持恒温，开启超声波，于400W功率下，以60kHz超声波作用20-30min，在此期间边加热边搅拌；作用后以真空泵抽滤，收集滤液，得多糖提取液；
（3）、将提取液用旋转蒸发器在70-90℃下浓缩至原体积的1/3，然后与等体积的正丁醇-三氯甲烷溶液混合，于分液漏斗中剧烈震荡后静置30min，弃去下层液体，依据本步骤反复操作3次得纯化的多糖溶液；
（4）、于上述所得多糖溶液中加入3-4倍体积乙醇，待充分产生沉淀后，3000-4000rpm下离心10-15min，收集下层沉淀；将沉淀物以-70~-60℃于冻干机中冷冻干燥，即得多糖结晶，装入密封容器中保存备用；
（5）、使用玻璃层析柱湿法装填Sephadex A-25纤维素凝胶，装填高度35-45cm，将整个系统用蒸馏水平衡24h，之后加入前述步骤制得的粗多糖，以蠕动恒流泵过柱，上样量：50-150mg；洗脱速度：8-12ml/h；依次用0.05-0.15mol/L、0.2-0.4 mol/L、0.45-0.55 mol/L和0.6-0.8 mol/L的NaCl溶液洗脱；四个浓度梯度依次收集50ml，75ml，75ml，50ml洗脱液；
（6）、进一步纯化使用4组玻璃层析柱湿法装填Sephadex G-200纤维素凝胶，装填高度35-45cm，在加入样品前，将整个系统用蒸馏水平衡24h；4组玻璃层析柱中分别通入上述4组洗脱液，以蠕动恒流泵过柱，洗脱速度：4-8ml/h；用0.1-0.3mol/L的NaCl溶液洗脱；
（7）、收集各Sephadex G-200柱滤液于旋转蒸发器在70-90℃下浓缩至原体积的1/3，分别加入3-4倍体积乙醇，待充分产生沉淀后，3000-4000rpm下离心10-15min，收集下层沉淀；将沉淀物以-70~-60℃于冻干机中冷冻干燥，即得各组分纯多糖结晶。
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