[发明专利]以花生半片成熟种子为受体的非组织培养基因转化方法

摘要

本发明公开了一种以花生半片成熟种子为受体的非组织培养基因转化方法，该方法包括：(1)将花生种子去壳，用蒸馏水冲洗和浸泡；然后消毒，去种皮，切开种子，取含胚的半粒种子，沿胚的子叶节点切去胚芽，得到外植体；(2)将农杆菌接种至YEP液体培养液中，培养过夜；离心收集农杆菌菌体，并重悬于包含乙酰丁香酮的液体MS培养基中，得到侵染液；(3)将待外植体浸浮于侵染液中；取出外植体平铺于共培养培养基中，黑暗培养2-3天；再在光照下培养7-10天，得到共培养后的外植体；(4)将共培养后的外植体移至灭菌砂土中，培养驯化后，移入温室中繁殖。本发明方法实验周期短，转化效率和存活率高，在不同基因型花生品种间的转化效果稳定；避免了传统共培养法所要求的严格的组织培养技术。

主权项

一种以花生半片成熟种子为受体的非组织培养基因转化方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将花生种子去壳，用蒸馏水冲洗，再在蒸馏水中浸泡30‑60分钟；然后消毒，去种皮，沿子叶间缝隙切开种子，取含胚的半粒种子，再沿胚的子叶节点切去胚芽，得到待转化的外植体；(2)将含有待转化质粒的农杆菌接种至YEP液体培养液中，28℃振荡培养过夜；将YEP液体培养液离心收集农杆菌菌体，并将农杆菌菌体重悬于含有乙酰丁香酮的液体MS培养基中，得到侵染液；(3)将待转化的外植体浸浮于侵染液中10‑20分钟，然后将外植体和侵染液在真空条件下静置10‑20分钟；取出外植体，滤干菌液后平铺于共培养培养基中，黑暗培养2‑3天；再在光照16h/d的条件下培养7‑10天，得到共培养后的外植体；(4)将共培养后的外植体移至灭菌砂土中，培养驯化后，移入温室中繁殖。