[发明专利]一种产丁二酸大肠杆菌基因工程菌株的构建方法无效
| 申请号： | 201110038939.3 | 申请日： | 2011-02-16 |
| 公开（公告）号： | CN102154339A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 姜岷;梁丽亚;马江峰;刘嵘明;陈可泉;韦萍;欧阳平凯 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N15/52;C12N15/63;C12N1/21 |
| 代理公司： | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人： | 樊文红 |
| 地址： | 210009 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种产丁二酸大肠杆菌基因工程菌株的构建方法，具体涉及一种基于NAD(H)系统改造后的大肠杆菌菌株的构建方法，属于生物工程技术领域。本发明通过分子生物学手段改造大肠杆菌的NAD(H)生物合成途径，过量表达与该途径有关的酶的活性，有效的提高了大肠杆菌胞内NAD(H)的总量，并综合利用氧化还原电位等发酵调控手段进一步提高了胞内NAD(H)的总量并维持合适的NADH/NAD+比例，确定基于辅酶调控丁二酸的生物合成策略，大幅度提高了丁二酸的合成效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 产丁二酸 大肠杆菌 基因工程 菌株 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种产丁二酸大肠杆菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于：（1）纯化扩增出pncB基因，和/或纯化扩增出nadD基因，和/或纯化扩增出nadE基因后，构建得到过量表达烟酸磷酸核糖转移酶、烟酸单核苷酸腺苷酰转移酶、或者NAD合成酶中的一种或几种的表达质粒；（2）将步骤（1）所述的质粒导入缺乏乳酸脱氢酶基因，丙酮酸甲酸裂解酶基因活性的菌株E.coliNZN111的感受态，获得阳性转化子；（3）利用步骤（2）的阳性转化子过量表达烟酸磷酸核糖转移酶、烟酸单核苷酸腺苷酰转移酶、或者NAD合成酶中的一种或几种，恢复其在厌氧条件下代谢葡萄糖的能力，得到产丁二酸基因工程菌。
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