[发明专利]普洱茶微生物菌群中的优势真菌及其谱图

摘要

本发明涉及普洱茶渥堆发酵过程中优势真菌菌群的鉴定方法及其专用引物。其中，所述鉴定方法包括以下步骤：1)取不同发酵过程中的普洱茶待测样品；2)提取待测样品的总DNA；3)以待测样品的总DNA为模板，在专用引物的引导下进行PCR扩增；4)对目的片段进行变性梯度凝胶电泳，sybrgreen染色后得到DGGE指纹图谱；5)回收优势条带，并以此为模板，在专用引物的引导下进行PCR扩增，对目的片段进行测序；6)对测序结果进行序列比对分析，确定普洱茶渥堆发酵优势真菌菌群结构。

主权项

一种普洱茶渥堆发酵过程中优势真菌菌群的分子鉴定方法，包括以下步骤：1)取渥堆发酵过程中不同翻堆次数和位置的普洱茶作为待测样品；2)提取待测样品的总DNA，并对其进行纯化；3)以待测样品的总DNA为模板，在专用引物——第一步扩增采用的引物为GeoA2：5′CCAGTAGTCATATGCTTGTCTC‑3′和Geo11：5′‑ACCTTGTTACGACTTTTACTTCC‑3′；第二步扩增采用的引物为：NS31‑GC：5’‑CGCCCGGGGCGCGCCCCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGTTGGAGGGCAAGTCTGGTGCC‑3’和Glol：5’GCCTGCTTTAAACACTCTA‑3’的引导下进行PCR扩增，扩增结束后，对目的片段进行回收及纯化；4)对纯化的目的片段进行变性梯度凝胶电泳，染色后得到DGGE指纹图谱；5)从凝胶中回收优势条带，并以此为模板，用上游引物GeoA2：5′‑CCAGTAGTCATATGCTTGTCTC‑3′和；下游引物Geo11：5′‑ACCTTGTTACGACTTTTACTTCC‑3′，组成的专用引物的引导下进行PCR扩增，扩增结束后，对目的片段进行回收、纯化及测序；6)步骤5的测序结果和标准菌群的序列进行比对，确定渥堆发酵普洱茶的优势真菌菌群。