[发明专利]一种利用液质联用仪检测红曲中桔霉素含量的方法

摘要

本发明涉及一种桔霉素的检测方法，特别是利用液质联用仪检测红曲中桔霉素含量的方法。它包括超声提取法对样品进行前处理，超高压液相色谱检测和质谱检测步骤，方法：采用waters BEH C18液相色谱柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱条件，柱温为室温；用四级杆质谱检测器：正离子方式，电喷雾源，以母离子，子离子为定性定量离子，结果：本方法桔霉素的标准溶液在0.001～50μg/L之间线性良好，回归方程为y＝1923.2x+270.29，R2＝0.9998；样品的回收率为83.6％，检测限为0.001μg/L。结论：本方法准确度高，重复性好，适用于红曲中桔霉素的定量检测。

主权项

一种利用液质联用仪检测红曲中桔霉素含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：(一)、样品处理过程：(1)、样品中桔霉素的提取：将试样充分混匀，称取0.2～1.0g，放于50mL离心管中；按照1∶10的体积比加入甲醇，超声提取30分钟，离心，沉淀，收集上清液；(2)、将第(1)步的沉淀物按照1∶10的体积比加入甲醇，超声提取30分钟，离心，沉淀，收集上清液；(3)、将将第(2)步的沉淀物按照1∶10的体积比加入甲醇，超声提取30分钟，离心，沉淀，收集上清液；(4)将第(1)、(2)和(3)步的上清液合并，常温减压浓缩至5mL；(5)、浓缩液离心后转移至刻度试管，读取体积备用；(6)、脱色素处理：将大孔树脂装入1.6×30cm层析柱，柱床15‑20cm，用约2倍体积的70％甲醇水溶液流过填充好的层析柱，使甲醇水溶液浸过层析柱中的大孔树脂的顶部；取1mL第(5)步的浓缩液，上柱，置于树脂柱顶部，用70％甲醇水溶液以自上而下通过树脂柱，当红色色素到达层析柱的末端时开始准确收集30mL洗脱液，洗脱液用孔径0.22μm的微孔滤膜过滤，所得过滤液用高效液相色谱‑质谱联用仪进行测定；(二)、色谱与质谱条件：(1)、所用仪器为Waters液相色谱‑质谱联用仪，色谱柱为BEH C18液相色谱柱(50*2.1mm，1.7μm)；(2)、质谱条件：正离子方式，电喷雾源(ESI)，质量分析器为四级杆，毛细管电压1.00kv，多反应检测(MRM)锥孔电压35V，离子源温度120℃，锥孔反吹气流量50L/hr，脱溶剂气流量500L/hr，脱溶剂温度350℃，母离子m/z＝251(M+1)，锥孔电压35V，子离子m/z＝233和205，碰撞能量分别为27V和17V；(3)、液相条件：色谱柱：BEH C18液相色谱柱(50*2.1mm，1.7μm)；(4)、流动相：A：乙腈；B：含体积0.1％甲酸的水，梯度洗脱条件，柱温为25℃，进样量10μL；(三)、标准曲线的绘制：用甲醇配制0.001μg/L、0.01μg/L、0.05μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10μg/L、50μg/L的桔霉素标准溶液，在所述色谱和质谱条件下测定，记录峰面积，绘制峰面积‑浓度标准曲线；(四)、结果计算：样品中桔霉素含量X＝C*V1*V2/m；式中：X——样品中桔霉素的含量，单位μg/kg；C——由标准曲线查得的洗脱液中的桔霉素浓度，单位μg/kg；V1——洗脱液体积，单位mL；V2——样品浓缩液体积，单位mL；m——样品质量，单位g。