[发明专利]石油污染土壤生物修复过程中微生物多样性的PCR-DGGE分析方法

摘要

本发明属于土壤微生物群落多样性分析技术领域，公开了PCR-DGGE法分析石油污染土壤微生物群落多样性的最佳条件和试剂用量。主要体现在：①取0.4g土样可提取足量的DNA；②取1μL纯化DNA直接用于PCR反应；③取3～5μL PCR产物用于DGGE实验；④制胶时宜用9μL TEMED，40μL 10％APS投加到18mL变性丙烯酰胺胶溶液中；⑤灌胶后在顶端用保鲜膜覆盖，隔夜放置，能获得优良的变性胶；⑥设置电压120V，电泳温度60℃，电泳时间5h，可获得良好的DGGE图谱；⑦银染时终止液可不予使用。本发明主要应用于石油污染土壤生物修复过程中分子生态学研究，也可为其他环境样品的分子生态学研究提供参考。

主权项

采用的石油污染土壤生物修复过程中微生物多样性的PCR‑DGGE分析方法，提取土壤样品DNA的最佳土壤样品量为0.4g，得到的DNA沉淀采用100μLTE缓冲液溶解，纯化后的DNA沉淀采用50μL TE缓冲液溶解。