[发明专利]人脐带间充质干细胞及其制备方法

摘要

本发明公开了一种人脐带间充质干细胞及其制备方法，它是采用足月剂宫产健康胎儿脐带经过无菌处理，机械剪切，暴露沃顿胶，经过胶原酶消化后分离培养而成，经冷冻复苏后细胞活力无明显下降，是细胞治疗的理想种子细胞。本发明还涉及经上述方法制备的原始间充质干细胞，按照国际细胞治疗协会(ISCT)制定的间充质干细胞的标准进行形态学、免疫表型以及体外分化实验鉴定确认为间充质干细胞。其细胞数量、细胞活力、纯度及其倍增时间、增殖能力均明显高于骨髓来源的间充质干细胞。

主权项

一种人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，它是采用以下工艺方法制备：从保存液取出脐带后，剪断双侧结扎部分，去除脐带血管内淤血，将脐带浸入含抗生素的Hanks’Balanced Salt Solution中，用D‑PBS反复冲洗脐带和脐静脉内腔3次，剔除血管，暴露沃顿胶，然后将脐带剪成1‑3mm3大小的组织块后放入试剂瓶，加入质量体积百分比浓度为0.1％的消化液，置于37℃恒温震荡仪内持续消化4～10h，100目筛网过滤，离心收集细胞；加入HBSS液冲洗细胞3次，用DMEM/F12培养基溶液重悬细胞，调整细胞密度4.8×103～1×104/cm2，接种于6孔板内，37℃、体积分数为5％CO2孵箱内培养，24h后换液，以后每隔3天换液一次，待细胞达到80％融合时，传代培养，即时使用或冷冻保存备用。