[发明专利]基于荧光量子点编码二氧化硅球进行多种转基因植物的检测方法

摘要

基于荧光量子点编码二氧化硅球进行多种转基因植物的检测方法，属于材料应用技术领域。本发明采用反相微乳法制备的二氧化硅球结构均一，过程简单易操作，控制QDs的种类和比例能够准确编码二氧化硅球，二氧化硅对QDs的荧光起到保护作用，提高QDs的稳定性。利用荧光量子点编码二氧化硅球成功实现了多种转基因植物检测的目的。

主权项

一种荧光量子点编码二氧化硅球进行多种转基因植物的检测方法，其特征在于：A、采用下列不同体积比荧光量子点编码二氧化硅球的制备：535nmQDs︰629nmQDs=2︰1，535nmQDs︰629nmQDs=1︰2，535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰1︰2，535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰2︰2（1）将15mL的曲拉通和15mL的正己醇混合10min，加入60mL的环己烷，搅拌20min；（2）取1400μL 535nmQDs和700μL 629nmQDs混合均匀，加入到步骤（1）溶液中，均匀搅拌30min，配置成微乳体系；（3）向上述微乳体系中加入2mL氨水，混合30min，加入2mL正硅酸四乙酯TEOS和2mL 3‑氨丙基三乙氧基硅烷APTES，水解12h；（4）加入15mL丙酮破乳，搅拌30min，离心醇洗3次，将二氧化硅球分散在水中，制得535nm：629nmQDs=2：1编码的二氧化硅球；（5）调节QDs的种类和比例，制备其它三种荧光QDs编码的二氧化硅球：取700μL 535nmQDs和1400μL 629nmQDs混合，其他按上述相同条件制得535nmQDs︰629nmQDs=1︰2编码的二氧化硅球；取500μL 535nmQDs，500μL 602nmQDs和1000μL 650nmQDs混合，其他按上述相同条件制得535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰1︰2编码的二氧化硅球；取400μL 535nmQDs，800μL 602nmQDs和800μL 650nmQDs混合，其他按上述相同条件制得535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰2︰2编码的二氧化硅球；B、量子点编码二氧化硅球检测转基因玉米、大豆、油菜、棉花：（1）分别制备编码的二氧化硅球‑ probe DNA偶联物：取2μL羧基修饰的probe DNA 1，加入50μL的1‑乙基‑（3‑二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐EDC和50μL的N‑羟基琥珀酰亚胺NHS，活化30min后，加入100μL的535nmQDs︰629nmQDs=2︰1编码二氧化硅球水溶液中，反应2h，离心洗涤3次，制得编码的二氧化硅球‑ probe DNA 1偶联物；同样probe DNA 2活化后和535nmQDs︰629nmQDs=1︰2编码二氧化硅球偶联，离心洗涤3次，制得编码的二氧化硅球‑ probe DNA 2偶联物；probe DNA 3活化后和535nmQDs：602nmQDs︰650nmQDs=1︰1︰2编码的二氧化硅球偶联，离心洗涤3次，制得编码的二氧化硅球‑ probe DNA 3偶联物；probe DNA 4活化后和535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰2︰2编码的二氧化硅球偶联，离心洗涤3次，制得编码的二氧化硅球‑ probe DNA 4偶联物；（2）将四种Target DNA1，Target DNA2，Target DNA3，Target DNA4各取取2μL混合在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入100μL 的535nmQDs：629nmQDs=2：1编码二氧化硅球‑ probe DNA1，室温杂交12h，离心，分别将上清液和沉淀放在不同的管中；将沉淀离心、超纯水洗涤3次，分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入经氨基‑6‑甲基香豆素乙酸盐AMCA染料标记的capture DNA1，室温杂交12h，离心洗涤3次，取沉淀分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，进行荧光扫描，即得到进行Target 1检测的荧光谱图，进行转基因玉米的检测；（3）在步骤（2）离心所得上清液中加入100μL 的535nmQDs︰629nmQDs=1︰2编码二氧化硅球‑probe 2，室温杂交12h，离心，分别将上清液和沉淀放在不同的管中；将沉淀离心洗涤3次，分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入AMCA标记的capture DNA2，室温杂交12h，离心洗涤3次，取沉淀分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，进行荧光扫描，即得到进行target 2检测的荧光谱图，进行转基因大豆的检测；（4）在步骤（3）离心所得上清液中加入100μL 的535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰1︰2编码二氧化硅球‑probe 3，室温杂交12h，离心，分别将上清液和沉淀放在不同的管中；将沉淀离心洗涤3次，分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入AMCA标记的capture DNA3，室温杂交12h，离心洗涤3次，取沉淀分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，进行荧光扫描，即得到进行target 3检测的荧光谱图，进行转基因油菜的检测；（5）在步骤（4）离心所得上清液中加入100μL 的535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰2︰2编码二氧化硅球‑probe 4，室温杂交12h，离心，分别将上清液和沉淀放在不同的管中；将沉淀离心洗涤3次，分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入AMCA标记的capture DNA4，室温杂交12h；离心洗涤3次，取沉淀分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，进行荧光扫描，即得到进行target 4检测的荧光谱图，进行转基因棉花的检测。