[发明专利]基于荧光量子点编码二氧化硅球进行多种转基因植物的检测方法

权利要求书

1.一种荧光量子点编码二氧化硅球进行多种转基因植物的检测方法，其特征在于：

A、采用下列不同体积比荧光量子点编码二氧化硅球的制备：

535nmQDs︰629nmQDs=2︰1，

535nmQDs︰629nmQDs=1︰2，

535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰1︰2，

535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰2︰2

（1）将15mL的曲拉通和15mL的正己醇混合10min，加入60mL的环己烷，搅拌20min；

（2）取1400μL 535nmQDs和700μL 629nmQDs混合均匀，加入到步骤（1）溶液中，均匀搅拌30min，配置成微乳体系；

（3）向上述微乳体系中加入2mL氨水，混合30min，加入2mL正硅酸四乙酯TEOS和2mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES，水解12h；

（4）加入15mL丙酮破乳，搅拌30min，离心醇洗3次，将二氧化硅球分散在水中，制得535nm：629nmQDs=2：1编码的二氧化硅球；

（5）调节QDs的种类和比例，制备其它三种荧光QDs编码的二氧化硅球：

取700μL 535nmQDs和1400μL 629nmQDs混合，其他按上述相同条件制得535nmQDs︰629nmQDs=1︰2编码的二氧化硅球；

取500μL 535nmQDs，500μL 602nmQDs和1000μL 650nmQDs混合，其他按上述相同条件制得535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰1︰2编码的二氧化硅球；

取400μL 535nmQDs，800μL 602nmQDs和800μL 650nmQDs混合，其他按上述相同条件制得535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰2︰2编码的二氧化硅球；

B、量子点编码二氧化硅球检测转基因玉米、大豆、油菜、棉花：

（1）分别制备编码的二氧化硅球- probe DNA偶联物：

取2μL羧基修饰的probe DNA 1，加入50μL的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐EDC和50μL的N-羟基琥珀酰亚胺NHS，活化30min后，加入100μL的535nmQDs︰629nmQDs=2︰1编码二氧化硅球水溶液中，反应2h，离心洗涤3次，制得编码的二氧化硅球- probe DNA 1偶联物；

同样probe DNA 2活化后和535nmQDs︰629nmQDs=1︰2编码二氧化硅球偶联，离心洗涤3次，制得编码的二氧化硅球- probe DNA 2偶联物；

probe DNA 3活化后和535nmQDs：602nmQDs︰650nmQDs=1︰1︰2编码的二氧化硅球偶联，离心洗涤3次，制得编码的二氧化硅球- probe DNA 3偶联物；

probe DNA 4活化后和535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰2︰2编码的二氧化硅球偶联，离心洗涤3次，制得编码的二氧化硅球- probe DNA 4偶联物；

（2）将四种Target DNA1，Target DNA2，Target DNA3，Target DNA4各取取2μL混合在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入100μL 的535nmQDs：629nmQDs=2：1编码二氧化硅球- probe DNA1，室温杂交12h，离心，分别将上清液和沉淀放在不同的管中；

将沉淀离心、超纯水洗涤3次，分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入经氨基-6-甲基香豆素乙酸盐AMCA染料标记的capture DNA1，室温杂交12h，离心洗涤3次，取沉淀分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，进行荧光扫描，即得到进行Target 1检测的荧光谱图，进行转基因玉米的检测；

（3）在步骤（2）离心所得上清液中加入100μL 的535nmQDs︰629nmQDs=1︰2编码二氧化硅球-probe 2，室温杂交12h，离心，分别将上清液和沉淀放在不同的管中；

将沉淀离心洗涤3次，分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入AMCA标记的capture DNA2，室温杂交12h，离心洗涤3次，取沉淀分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，进行荧光扫描，即得到进行target 2检测的荧光谱图，进行转基因大豆的检测；

（4）在步骤（3）离心所得上清液中加入100μL 的535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰1︰2编码二氧化硅球-probe 3，室温杂交12h，离心，分别将上清液和沉淀放在不同的管中；

将沉淀离心洗涤3次，分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入AMCA标记的capture DNA3，室温杂交12h，离心洗涤3次，取沉淀分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，进行荧光扫描，即得到进行target 3检测的荧光谱图，进行转基因油菜的检测；

（5）在步骤（4）离心所得上清液中加入100μL 的535nmQDs︰602nmQDs︰650nmQDs=1︰2︰2编码二氧化硅球-probe 4，室温杂交12h，离心，分别将上清液和沉淀放在不同的管中；

将沉淀离心洗涤3次，分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，加入AMCA标记的capture DNA4，室温杂交12h；离心洗涤3次，取沉淀分散在200μL、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中，进行荧光扫描，即得到进行target 4检测的荧光谱图，进行转基因棉花的检测。