[发明专利]一种苏云金杆菌杀虫蛋白和芽胞吸附复合剂型的制备方法

摘要

本发明公开了一种苏云金杆菌杀虫蛋白和芽胞吸附复合剂型的制备方法。该方法是在苏云金杆菌发酵液中预先加入微米级矿物吸附剂，然后直接加碱溶解伴胞晶体，产生的活性杀虫蛋白同时被矿物载体吸附，实现对活性杀虫蛋白的负载固定。本发明制备苏云金杆菌杀虫蛋白和芽胞吸附复合剂型方法简便，成本低，省去了苏云金杆菌胞晶混合物用NaCl溶液和无菌去离子水洗涤过程，实现了活性杀虫蛋白制备与吸附的同步进行。所得到的吸附复合剂型吸附量大，杀虫活性高。此外，由于芽胞的增效作用，活性杀虫蛋白吸附制剂的杀虫活性较原毒素吸附剂型有了进一步提高。

主权项

一种苏云金杆菌杀虫蛋白和芽胞吸附复合剂型的制备方法，其特征在于按照下列步骤操作：（1）采用SDS‑PAGE电泳法对苏云金芽胞杆菌发酵液中的伴胞晶体进行含量测定，计算发酵液中杀虫蛋白总量；（2）取微米级矿物颗粒用水配置成重量与体积比为5.0%—20.0%的悬浮液，然后按照矿物：杀虫蛋白的质量比=10:1~1:15的比例将矿物悬液加入到苏云金芽胞杆菌发酵液中；（3）将步骤（2）得到的苏云金芽胞杆菌发酵液升温至37‑60℃，用浓度1mol/L NaOH溶液调节pH至 11—12，溶解4—6 h； （4）将步骤（3）得到的溶解液用浓度1mol/L HCl溶液调节pH至 6‑8，并缓慢降至0℃‑35℃，继续搅拌吸附1‑10 h；（5）将步骤（4）得到的吸附悬浮液进行离心浓缩，脱出上清液，即得到苏云金杆菌杀虫蛋白和芽胞的吸附复合剂型，冷冻保存。