[发明专利]一种曲霉半乳甘露聚糖单克隆抗体的制备及其产品

摘要

一种曲霉半乳甘露聚糖单克隆抗体的制备及其产品，本发明以烟曲霉(Aspergillus fumigatus)为出发菌株，采用乙醇分级沉淀、离子交换柱层析和分子筛层析相结合的复合分离纯化技术，分离出曲霉半乳甘露聚糖蛋白。用半乳甘露聚糖蛋白免疫小鼠，末次免疫10天后，取小鼠脾脏细胞，阴性对照小鼠脾脏，制备饲养细胞。按照1∶5比例，和Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG的作用下细胞融合。试验获得2株阳性亚克隆YR1、YR2，且血清型检测均为IgM型，对曲霉半乳甘露聚糖活度常数为1×1010、1×109，对酵母来源乳糖的活度常数为2×108、1×108，对大肠杆菌来源脂多糖活度常数为3×108、5×107。用一株为捕获抗体，另一株为酶标抗体，用夹心酶联免疫原理，制备曲霉半乳甘露聚糖检测试剂盒，灵敏度达到0.1ng/ml。

主权项

一种半乳甘露聚糖单克隆抗体制备，其是首先利用乙醇沉淀、离子交换层析、分子筛层析等方法从烟曲霉的发酵物中提取半乳甘露聚糖抗原，接着免疫小鼠，制备单克隆抗体YR1和YR2，为IgM免疫球蛋白，活度常数分别为1×1010、1×109。使用YR2为酶标抗体，YR1为捕获抗体，可以制备成试剂盒，用来检测血清中的侵袭性曲霉，作为临床诊断的参考之一。