[发明专利]一种采用PCR特异检测片形吸虫的试剂盒

摘要

本发明公开了一种片形吸虫特异PCR检测试剂盒，它含有DNA裂解液、PCR反应液和肝片吸虫、大片吸虫、中间型吸虫DNA阳性对照液。本发明还提供了一种采用特异PCR方法检测片型吸虫的方法。本发明可快速、特异、灵敏地检测螺内片形吸虫尾蚴、感染动物粪便内片形吸虫虫卵的诊断和检测。本发明建立了用于检测肝片吸虫、大片吸虫、中间型吸虫成虫、尾蚴、虫卵的快速、特异、敏感的PCR方法，可准确地鉴定肝片吸虫、大片吸虫、中间型吸虫成虫、尾蚴、虫卵。本发明的试剂盒操作简单程序化，方法特异性强，敏感性高，结果判定客观，可用于片形吸虫的快速鉴别。

主权项

一种采用特异PCR检测片形吸虫的试剂盒，其特征在于：含有DNA裂解液、PCR反应液和肝片吸虫、大片吸虫、中间型吸虫DNA阳性对照液，所述的DNA裂解液中由细胞裂解液、EDTA、蛋白酶K和RNase A溶液配制而成，在所述的DNA裂解液中，所述的细胞裂解液的终浓度为7‑10uM，所述的EDTA在所述的DNA裂解液中的终浓度为0.5M，所述的蛋白酶K在所述的DNA裂解液中的终浓度为18‑20mM，所述的RNase A在所述的DNA裂解液中的终浓度为3‑5uM，所述的PCR反应液中由dATP、dTTP、dGTP、dCTP、扩增肝片吸虫的下游引物、扩增大片吸虫的下游引物、扩增肝片吸虫和大片吸虫的共用上游引物与MgCl2配制而成，所述的扩增肝片吸虫的下游引物的序列为5‘‑CCAATGACAAAGTGACAGCG‑3’，所述的扩增大片吸虫的下游引物为5‘‑CCAATGACAAAGTAACAGCA‑3’，扩增肝片吸虫和大片吸虫的共用上游引物的序列为5‘‑ATATTGCGGCCATGGGTTAG‑3’，在所述的PCR反应液中，所述的dATP、dTTP、dGTP和dCTP的终浓度均为200μM，所述的扩增肝片吸虫的下游引物、扩增大片吸虫的下游引物和扩增肝片吸虫和大片吸虫的共用上游引物的终浓度均为50pmol/μL，所述的MgCl2的终浓度为2mM。