[发明专利]一种肺泡表面活性蛋白质(SP-B和SP-C)的分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种肺泡表面活性蛋白(SP-B和SP-C)的分离纯化方法，主要包括如下步骤：(1)灌洗猪肺主气管，收集溢出的泡沫；(2)向收集到泡沫中加入氯仿/甲醇(体积比为1∶1)的混合液并进行充分混合后，收集下层清液；(3)将(2)中收集到的下层清液进行减压蒸馏，获得的溶液放入冰箱储存备用；(4)将(3)中得到的溶液加入凝胶色谱柱中进行分离纯化，收集对应排除体积的产品，并对其进行减压蒸馏，获得肺泡表面活性蛋白(SP-B和SP-C)。本发明涉及一种肺泡表面活性蛋白SP-B和SP-C的分离纯化方法，特别是以新鲜猪肺为原料进行分离纯化的方法。

主权项

一种肺泡表面活性蛋白质(SP‑B和SP‑C)的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)一只正常的新鲜猪肺，用自来水冲去表面血迹后，顺着主气管向其中灌入温度为25～40℃的生理盐水，并挤压猪肺，收集流出的泡沫和水，重复上述过程10～20次，直至猪肺的主气管内基本无泡沫溢出，得到泡沫与生理盐水的混合物；(2)将步骤(1)所得混合物倒入2000ml的分液漏斗中，静置5min，放出下层液体，并将剩余物转移至离心管内进行离心分离，离心机转速为3000转/分，离心时间为45min；(3)离心完毕，将泡沫层刮出，放入250ml分液漏斗中，加入氯仿/甲醇(体积比为1∶1)混合液50～60ml，充分混合后静置30min，收集下层清液；(4)将步骤(3)所得下层清液倒入250ml单口烧瓶中，减压蒸馏，除去部分溶剂，即得到浓缩后的肺泡表面活性物的混合溶液20～30ml；(5)将步骤(4)所得混合液加入层析柱中进行分离，柱子的固定相为葡聚糖凝胶LH‑60，柱长为50cm，柱子内经为1cm，流动相为氯仿/甲醇(体积比1∶1)的混合溶液，收集排出体积为90～130ml的产品共40ml，即为SP‑B溶液，再收集排出体积为170～210ml的产品共40ml，即为SP‑C溶液；(6)将步骤(5)得到的SP‑B溶液和SP‑C溶液分别进行减压蒸馏，除去溶剂即得纯化的SP‑B和SP‑C。