[发明专利]一种肺泡表面活性蛋白质(SP-B和SP-C)的分离纯化方法

权利要求书

1.一种肺泡表面活性蛋白质(SP-B和SP-C)的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)一只正常的新鲜猪肺，用自来水冲去表面血迹后，顺着主气管向其中灌入温度为25～40℃的生理盐水，并挤压猪肺，收集流出的泡沫和水，重复上述过程10～20次，直至猪肺的主气管内基本无泡沫溢出，得到泡沫与生理盐水的混合物；

(2)将步骤(1)所得混合物倒入2000ml的分液漏斗中，静置5min，放出下层液体，并将剩余物转移至离心管内进行离心分离，离心机转速为3000转/分，离心时间为45min；

(3)离心完毕，将泡沫层刮出，放入250ml分液漏斗中，加入氯仿/甲醇(体积比为1∶1)混合液50～60ml，充分混合后静置30min，收集下层清液；

(4)将步骤(3)所得下层清液倒入250ml单口烧瓶中，减压蒸馏，除去部分溶剂，即得到浓缩后的肺泡表面活性物的混合溶液20～30ml；

(5)将步骤(4)所得混合液加入层析柱中进行分离，柱子的固定相为葡聚糖凝胶LH-60，柱长为50cm，柱子内经为1cm，流动相为氯仿/甲醇(体积比1∶1)的混合溶液，收集排出体积为90～130ml的产品共40ml，即为SP-B溶液，再收集排出体积为170～210ml的产品共40ml，即为SP-C溶液；

(6)将步骤(5)得到的SP-B溶液和SP-C溶液分别进行减压蒸馏，除去溶剂即得纯化的SP-B和SP-C。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每次向猪肺主气管中灌入的生理盐水的体积为60～80ml，最后获得的泡沫与生理盐水的混合物的体积约为600～1600ml。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，由步骤(1)得到的泡沫与生理盐水的混合物静置后，放出的下层液体体积约为450～1450ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，两次减压蒸馏的温度均为40～50℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的柱层析分离法中，柱子温度为30～40℃，层析分离时控制流动相流速为15～20ml/h。

6.采用权利要求1～5任一项所述方法分离纯化肺泡表面活性蛋白质(SP-B和SP-C)。