[发明专利]一种转录水平基因表达调控的方法及应用

摘要

本发明属于生物医学和分子生物学领域，具体涉及一种利用小双链RNA进行转录水平调控基因表达的方法。本发明首先在基因组DNA序列上筛选并确认目标基因的作用靶点；然后，设计针对该作用靶点的特异siRNA或shRNA；最后，转染靶序列特异性的siRNA或者shRNA进入细胞核内。本发明利用小双链RNA，包括siRNA,shRNA和化学或者生物化学修饰后的siRNA构建到相关质粒中的shRNA等实现转录水平的基因下调或沉默，或者转录水平基因上调或者激活。所述的小双链RNA在转录水平具有强大的基因调控功能，尤其是在恶性肿瘤治疗研究中，转录水平下调癌基因或上调抑癌基因能发挥十分有效的抑癌作用。

主权项

一种转录水平基因表达调控的方法，其特征在于，其包括步骤：首先，在基因组DNA序列上（尤其在基因启动子区域和内含子区域）筛选并确认目标基因的作用靶点；然后，设计针对该作用靶点的特异siRNA或shRNA；并且将靶序列特异性的小双链RNA转染进入细胞内；最后，通过PCR和Western blotting方法检测目的基因的表达变化以及通过相应生物学技术观察作用细胞所发生的功能性以及形态学的改变。