[发明专利]一种免疫毒素及其制备方法和用途

摘要

本发明提供了一种分离的多肽，包含抗人单克隆抗体CD25的单链抗体ScFv，以及与所述单链抗体ScFv偶联的免疫毒素PE38KDEL。本发明还提供了编码上述多肽的DNA分子、含有该DNA分子的表达载体、宿主细胞和制备方法，并公开了该多肽在制备治疗T细胞介导的疾病的药物中的用途，以及含有该多肽的药物组合物。

主权项

免疫毒素CD25‑PE38KDEL的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤，(A)将抗CD25抗体的重链可变区和轻链可变区通过连接肽(G4S)3连接起来，构建CD25单链抗体ScFv，然后用连接肽将CD25单链抗体ScFv与PE38KDEL毒素连接，获得新的免疫毒素CD25‑PE38KDEL序列；(B)构建表达含有步骤A中所述免疫毒素CD25‑PE38KDEL序列的重组质粒，转化大肠杆菌BL21；(C)将步骤B中的大肠杆菌BL21诱导表达、菌体破壁、离心收集，获得免疫毒素CD25‑PE38KDEL包涵体；(D)将步骤C中获得的免疫毒素CD25‑PE38KDEL包涵体于室温使用8mol/l尿素溶液变性2小时，离心变性液，将收集的离心上清使用滤膜过滤备用；(E)His‑Ni++金属螯合柱用平衡液平衡，将步骤D中过滤备用的离心上清上样至His‑Ni++金属螯合柱，上样完备后再用平衡液平衡，然后将平衡液中的尿素含量缓慢降至0mol/l；和(F)使用洗脱液洗脱步骤E中的His‑Ni++金属螯合柱，将洗脱收集的蛋白再进行分子筛纯化，最终获得免疫毒素CD25‑PE38KDEL蛋白。