[发明专利]一种杂化凝胶载体的固定化酶制备方法

摘要

本发明涉及一种杂化凝胶载体的固定化酶制备方法，特别涉及无机纳米氧化物-有机高分子聚丙烯酰胺杂化凝胶的吸附-絮凝固定化酶技术，其工艺过程为：采用吸附-絮凝耦合固定化技术，以无机纳米氧化物为吸附载体，利用纳米材料如二氧化硅、钛、锆、磁性材料等比表面积大等特点，有效吸附溶液中的酶分子，再将纳米酶絮凝固定于有机高分子聚丙烯酰胺凝胶体系中，制备无机-有机杂化凝胶固定化酶。本发明制备的杂化凝胶固定化酶酶分子负载量大、不易脱落、稳定性好。

主权项

一种杂化凝胶载体的固定化酶制备方法，其特征在于该方法采用吸附 絮凝耦合固定化酶方法，以无机纳米氧化物粉体为吸附载体，利用纳米材料具有比表面积大的特点，有效吸附溶液中的酶分子；再将纳米酶絮凝固定于有机高分子聚丙烯酰胺凝胶体系中，制备无机 有机杂化凝胶固定化酶体系，其工艺过程为：载体溶液配制：将聚丙烯酰胺缓慢加入温水中，迅速搅拌，配成0.1～20g/L聚丙烯酰胺凝胶溶液，将吸附载体无机纳米氧化物粉体超声分散，制备含量为20.0～2400g/L纳米凝胶悬浮液，均质后备用；酶蛋白液配制：酶蛋白用缓冲溶液溶解，含量为1～50g/L；构建无机 有机杂化凝胶固定化酶体系，其组成及含量为：无机纳米氧化物载体10.0～2000g/L，酶蛋白0.1～30g/L，聚丙烯酰胺0.01～10g/L，其余为缓冲溶液；吸附 絮凝耦合固定化工艺过程：采用吸附 絮凝耦合固定化工艺过程，先混合酶蛋白液与纳米凝胶悬浮液，pH 6～10，30～45℃摇床预吸附酶蛋白20～60min后，添加聚丙烯酰胺凝胶溶液，30～45℃振荡，絮凝固定20～60min，得无机 有机杂化凝胶絮凝体，离心洗涤，直至上清液中检测不到蛋白质为止，获得杂化凝胶耦合固定化酶，2～4℃冰箱保存于缓冲溶液中备用。