[发明专利]一种杂化凝胶载体的固定化酶制备方法

权利要求书

1.一种杂化凝胶载体的固定化酶制备方法，其特征在于该方法采用吸附-絮凝耦合固定化酶方法，以无机纳米氧化物粉体为吸附载体，利用纳米材料具有比表面积大的特点，有效吸附溶液中的酶分子；再将纳米酶絮凝固定于有机高分子聚丙烯酰胺凝胶体系中，制备无机-有机杂化凝胶固定化酶体系，其工艺过程为：

载体溶液配制：将聚丙烯酰胺缓慢加入温水中，迅速搅拌，配成0.1～20g/L聚丙烯酰胺凝胶溶液，将吸附载体无机纳米氧化物粉体超声分散，制备含量为20.0～2400g/L纳米凝胶悬浮液，均质后备用；

酶蛋白液配制：酶蛋白用缓冲溶液溶解，含量为1～50g/L；

构建无机-有机杂化凝胶固定化酶体系，其组成及含量为：无机纳米氧化物载体10.0～2000g/L，酶蛋白0.1～30g/L，聚丙烯酰胺0.01～10g/L，其余为缓冲溶液；

吸附-絮凝耦合固定化工艺过程：采用吸附-絮凝耦合固定化工艺过程，先混合酶蛋白液与纳米凝胶悬浮液，pH 6～10，30～45℃摇床预吸附酶蛋白20～60min后，添加聚丙烯酰胺凝胶溶液，30～45℃振荡，絮凝固定20～60min，得无机-有机杂化凝胶絮凝体，离心洗涤，直至上清液中检测不到蛋白质为止，获得杂化凝胶耦合固定化酶，2～4℃冰箱保存于缓冲溶液中备用。

2.根据权利要求1所述的一种杂化凝胶载体的固定化酶制备方法，其特征在于所述的酶蛋白来自细胞，经增殖培养、离心分离菌体、超声波破碎、冷冻离心后，经饱和硫酸铵分级沉淀及透析脱盐初步纯化后，溶于缓冲溶液留存；酶蛋白也可以来自酶制剂。

3.根据权利要求1所述的一种杂化凝胶载体的固定化酶制备方法，其特征在于所述的无机纳米氧化物为二氧化硅、二氧化钛、二氧化锆或磁性材料。

4.根据权利要求1所述的一种杂化凝胶载体的固定化酶制备方法，其特征在于所添加的有机高分子凝胶包括：聚丙烯酰胺、聚氧化乙烯、聚乙烯醇、聚乙烯基甲基醚、聚乙烯吡咯烷酮中的一种。

5.根据权利要求4所述的一种杂化凝胶载体的固定化酶制备方法，其特征在于所述的聚丙烯酰胺包括：阳离子聚丙烯酰胺，阴离子聚丙烯酰胺，非离子聚丙烯酰胺。