[发明专利]利用EST-SSR标记构建棉花纤维转录遗传连锁图谱的方法

摘要

本发明属于棉花分子育种技术领域，具体涉及一种构建棉花纤维转录图谱的方法，步骤如下：以海岛棉Pima 3-79为父本，陆地棉鄂棉22为母本，杂交得F1；种植F1，使F1自交，得到F2；以该F2单株作为纤维转录图谱作图的起始材料；提取所述田间F2单株开花后5天的纤维的RNA，并反转录为cDNA，作为转录图谱的作图群体；利用报道的EST-SSR引物和自行设计的如序列表SEQ ID NO：1-90所示的引物分别对F2单株进行作图群体分析，用变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析；最后利用MAPMAKER/EXP.3.0作图软件分析数据，制作获得转录图谱。与现有方法相比本发明的方法简捷实用，QTL定位更加准确，便于棉花纤维发育相关基因的克隆。

主权项

构建棉花纤维转录图谱的方法，其特征在于按照下列步骤：1)以海岛棉品系Pima 3-79为父本，陆地棉品种鄂棉22为母本，杂交得到F1，种植F1，使F1自交，得到F2，以该F2单株作为纤维转录图谱作图的起始材料；2)提取所述田间F2单株开花后5天的纤维的RNA，并反转录为cDNA，作为转录图谱的作图群体；3)利用报道的EST-SSR引物和序列表SEQ ID NO：1-90所示的引物分别对F2单株进行作图群体分析，用变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析；其中：PCR反应体系如下：cDNA模板25ng，1x缓冲液，1.5mmol L-1MgCl2，0.3mmol L-1 dNTPs，0.2μmol L-1primer，0.5U Taq DNA聚合酶，不足部分用无菌的双蒸水补齐；PCR程序：94℃预变性2min；94℃变性1min、58℃复性1min、72℃延伸1min，30个循环；最后72℃延伸10min；4)记录带型，利用MAPMAKER/EXP.3.0作图软件分析数据，制作获得转录图谱。