[发明专利]一种分离纯化淡水鱼致敏蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种属于蛋白质纯化技术领域的分离纯化淡水鱼致敏蛋白的方法。该方法将富含致敏蛋白的淡水鱼组织经过粗提，在离子交换层析柱中进行梯度洗脱，并用高效液相色谱进一步的分离纯化，提高纯度，包括将原料经以下层析步骤：(a)双层功能的可耐受高盐型的阳离子交换；(b)反向高效液相色谱分离。该方法与传统方法相比具有分辨率高、重复性好、操作简便，纯化出的致敏蛋白纯度高的特点。此方法具有以下优点：(1)离子交换柱有开放性支持骨架，大分子可以自由进入和迅速扩散，故吸附容量大；(2)具有亲水性，对大分子的吸附不大牢固，用温和条件使可以洗脱，不致引起蛋白质变性或酶的失活；(3)多孔性，表面积大、交换容量大的优点。

主权项

一种分离纯化淡水鱼致敏蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)破碎淡水鱼组织细胞，利用盐析法提取蛋白质混合物；(2)透析去除蛋白质混合物中的盐；(3)采用双层功能的可耐受高盐型的阳离子交换柱对蛋白质混合物进行初步分离，具体方法如下：将步骤(2)除盐的蛋白质混合物加入到平衡后的阳离子交换柱中，用PH 7.5的含0.5-1.5mol/L NaCl的10mmol Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为3mL/min，收集保留时间为21min的洗脱峰；(4)对收集的洗脱液进行反向高效液相色谱分离，所用色谱柱为AscentisExpress peptide ES-C18HPLC，所用流动相为乙腈、三氟乙酸、双蒸水，参数条件为：B泵双蒸水+70％三氟乙酸，D泵30％乙腈，流动相体积比B∶D＝25∶75，流速为0.8mL/min，操作压力为30-230pa，检测波长为280nm，最终收集保留时间为33.282min的洗脱峰，收集的洗脱液即为淡水鱼致敏蛋白。