[发明专利]一种分离纯化淡水鱼致敏蛋白的方法无效
| 申请号： | 201010195345.9 | 申请日： | 2010-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN101885756A | 公开（公告）日： | 2010-11-17 |
| 发明（设计）人： | 薛文通;刘蓉;刘楚怡;张惠 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C07K1/36 | 分类号： | C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 史双元 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分离 纯化 淡水鱼 蛋白 方法 | ||
1.一种分离纯化淡水鱼致敏蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)破碎淡水鱼组织细胞，利用盐析法提取蛋白质混合物；
(2)透析去除蛋白质混合物中的盐；
(3)采用双层功能的可耐受高盐型的阳离子交换柱对蛋白质混合物进行初步分离，具体方法如下：将步骤(2)除盐的蛋白质混合物加入到平衡后的阳离子交换柱中，用PH 7.5的含0.5-1.5mol/L NaCl的10mmol Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为3mL/min，收集保留时间为21min的洗脱峰；
(4)对收集的洗脱液进行反向高效液相色谱分离，所用色谱柱为AscentisExpress peptide ES-C18HPLC，所用流动相为乙腈、三氟乙酸、双蒸水，参数条件为：B泵双蒸水+70％三氟乙酸，D泵30％乙腈，流动相体积比B∶D＝25∶75，流速为0.8mL/min，操作压力为30-230pa，检测波长为280nm，最终收集保留时间为33.282min的洗脱峰，收集的洗脱液即为淡水鱼致敏蛋白。
2.根据权利要求1所述的分离纯化淡水鱼致敏蛋白的方法，其特征在于，步骤(2)中所述透析使用的透析袋为截流Mr8000-14000 D16mm透析袋。
3.根据权利要求1所述的分离纯化淡水鱼致敏蛋白的方法，其特征在于，步骤(3)中所述阳离子交换柱中的填充物为琼脂糖凝胶CL-6B。
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