[发明专利]徐淮山羊体外重组过氧化氢酶体激活增殖受体的细胞定位方法无效
| 申请号： | 201010187618.5 | 申请日： | 2010-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN101864427A | 公开（公告）日： | 2010-10-20 |
| 发明（设计）人： | 李碧春;秦玉蓉;许峰;高波;阴彦辉;张振韬;孙敏;田智泉;陈国宏 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/85;C12Q1/02;G01N21/64 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种徐淮山羊体外重组过氧化氢酶体激活增殖受体的细胞定位方法。该方法是先构建含过氧化氢酶体激活增殖受体基因的载体pMD19-T-PPAR，再构建含有增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C1-PPAR：最后通过聚乙烯亚胺介导pEGFP-C1-PPAR转染NIH-3T3细胞，48h后于荧光倒置显微镜下观察细胞的发荧光部位，以确定过氧化氢酶体激活增殖受体蛋白的细胞亚定位情况。 | ||
| 搜索关键词： | 山羊 体外 重组 过氧化氢酶 激活 增殖 受体 细胞 定位 方法 | ||
【主权项】：
一种徐淮山羊体外重组过氧化氢酶体激活增殖受体的细胞定位方法，其特征在于包括以下步骤：(1)构建含过氧化氢酶体激活增殖受体基因的载体pMD19-T-PPAR：以徐淮山羊cDNA为模板，F、R为引物PCR扩增全长过氧化氢酶体激活增殖受体基因序列，PCR产物经胶回收试剂盒纯化回收后与pMD19-T连接，连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，LB含氨苄固体培养基培养12-16h后挑选阳性克隆经菌液PCR、酶切鉴定，将含正确插入片段的重组质粒命名为pMD19-T-PPAR，引物F：5’-CGAAGCTTATGGTTGACACAGAGATGCCGTTT-3’引物R：5’-CGGAATTCCTAATACAAGTCCTTGTAGATTTCC-3’；(2)构建含有增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C1-PPAR：用Hind III、EcoR I酶双切鉴定正确的pMD19-T-PPAR，胶回收目的片段，同时用Hind III、EcoR I酶双切原始载体pEGFP-C1，回收目的载体片段；T4DNA连接酶16℃过夜连接，产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆经菌液PCR、酶切鉴定，将含正确插入片段的重组质粒命名为pEGFP-C1-PPAR；(3)通过聚乙烯亚胺介导pEGFP-C1-PPAR转染NIH-3T3细胞，48h后于荧光倒置显微镜下观察细胞的发荧光部位，以确定过氧化氢酶体激活增殖受体蛋白的细胞亚定位情况。
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