[发明专利]通过定向进化手段获得的RSP_2728酯酶突变基因及酯酶在扁桃酸甲酯拆分反应中的应用无效
| 申请号： | 201010186865.3 | 申请日： | 2010-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN101870984A | 公开（公告）日： | 2010-10-27 |
| 发明（设计）人： | 于洪巍;汤晓玲;刘击 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N9/16;C12N15/70;C12N1/21;C12P41/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州裕阳专利事务所(普通合伙) 33221 | 代理人： | 江助菊 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程与酶工程领域。公开了酯酶基因RSP-2728的突变基因及其基因工程的应用。通过定向进化手段，采用易错PCR和基因克隆方法，以及一种适用于活性以及立体选择性的高通量筛选方法，通过四轮筛选，获得了最终突变酯酶XLA，XLB，XLC和XLD。将其应用于扁桃酸甲酯的拆分反应中，证实立体选择性最高的突变酯酶XLD其立体选择性与野生型相比较，其对映体选择性(E值)从E＝3.1提高到了E＝30.8；对底物的反应活性最高的XLB与野生型相比较，活性从10U/mg，最高提高到了142U/mg。在酯酶拆分消旋底物或者合成重要的药物中间体中，具有较好的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 定向 进化 手段 获得 rsp_2728 突变 基因 扁桃 酸甲酯 拆分 反应 中的 应用 | ||
【主权项】：
一种类球红细菌Rhodobacter sphaeroides的RSP 2728基因的突变基因，其特征在于，所述突变基因的核苷酸序列是下列核苷酸序列之一：(1)序列表中SEQ ID NO：1的核苷酸序列；(2)序列表中SEQ ID NO：2的核苷酸序列；(3)序列表中SEQ ID NO：3的核苷酸序列；(4)序列表中SEQ ID NO：4的核苷酸序列；
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