[发明专利]一种适应性广的蛋白酶的制备方法

摘要

一种适应性广的蛋白酶的制备方法，其包括如下步骤：(1)将产蛋白酶的枯草杆菌菌种复壮培养，得枯草杆菌复壮菌种；(2)枯草杆菌种子培养，得枯草杆菌种子培养液；(3)液态深层发酵培养，得枯草杆菌液态深层发酵培养液；(4)将枯草杆菌液态深层发酵培养液加硅藻土板框压滤，得粗滤液；(5)粗滤液膜浓缩，制得浓缩液；(6)将浓缩液冷冻干燥，即成。按本发明方法生产的蛋白酶，酶活力可达250000-280000u/g。适宜在pH6-10的条件下使用。

主权项

一种适应性广的蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）枯草杆菌菌种复壮培养：1）复壮培养基配制：复壮培养基配方：蛋白胨0.9-1.1wt％，牛肉膏0.5-0.7wt％，NaCl0.3-0.5wt％，琼脂2wt%,pH8.5-10.0，其余为水；将所述配料混匀，分放于培养皿中，0.1Mpa120-122℃灭菌30-35min，冷却到室温，制成复壮培养基，备用；2）接种与培养：将实验室保存的产蛋白酶的枯草杆菌环移取1-2环，接种到所述复壮培养基，置于36℃±1℃恒温培养60-70h，得复壮菌种，取出低温保存；（2）枯草杆菌种子培养：1）种子培养基配制：种子培养基配方：葡萄糖0.4-0.6wt%，蛋白胨0.4-0.6wt％，酵母膏0.4-0.6wt％，磷酸二氢钾0.05-0.08wt%,硫酸镁0.01-0.02wt%,氯化钠0.3-0.5wt％，其余为水，pH8.5-10.0，将所述配料混匀，0.1MPa120-122℃灭菌30-35min，冷却到39-41℃，制成种子培养基，备用；2）种子培养方法：取复壮的枯草杆菌菌种接种，接种量按种子培养基重的1-2wt%计，接种到冷却至39-41℃的种子培养基，36℃±1℃恒温培养60-70小时，恒温培养时，不断搅拌通风，搅拌速度为300-320转/分钟，通风量为1.3-1.4立方气体/升培养基/分钟，制成枯草杆菌种子培养液；（3）液态深层发酵培养：1）液态深层发酵培养基配方：葡萄糖4.0-6.0wt%，MgS04 0.01-0.02wt％，Na2HPO4 0.20-0.30wt％，蛋白胨0.15-0.25wt％,黄豆粉2.0-3.0wt%，pH8.5-10.0，其余为水；将所述配料混匀，0.1MPa120-122℃灭菌30-35min，冷却到39-41℃，制成液态深层发酵培养基，备用；(2)液态深层发酵培养：取枯草杆菌种子培养液接种,种子培养液的接种量按液态深层发酵培养基重的2-3wt%计，接种到冷却到39-41℃的液态深层培养基，36℃±1℃恒温培养60-70小时，恒温培养时，不断搅拌通风，搅拌速度为300-320转/分钟，通风量为1.3-1.4立方气体/升培养基/分钟，制成枯草杆菌液态深层发酵培养液；（4）粗滤：往枯草杆菌深层发酵培养液中添加相当于发酵培养液重3-5%的硅藻土，混合均匀，板框压滤，得粗滤液；（5）粗滤液膜浓缩：以微滤膜将粗滤液过滤浓缩至其原重量的1/4-1/5，制得浓缩液；（6）冷冻干燥：将浓缩液在-30℃下冷冻，抽真空干燥成粉末，即成。