[发明专利]产河豚毒素的气单胞菌从暗纹东方鲀组织分离、发酵培养和所产河豚毒素的检测方法

摘要

一种产河豚毒素的气单胞菌Aeromonas molluscorum从暗纹东方鲀Takifugu fasciatus组织分离、发酵培养和所产河豚毒素的检测方法，包括细菌分离、细菌鉴定、细菌发酵培养、气单胞菌所产河豚毒素的竞争性ELISA检测和LC-MS检测等方法。在本发明中，采用从暗纹东方鲀卵巢中分离细菌，采用TCBS培养基进行筛选，首次从河豚鱼体中分离到能产河豚毒素的气单胞菌，所分离的细菌采用了16SrDNA法进行了鉴定，分离到的气单胞菌所产的河豚毒素首次采用竞争性ELISA和LC-MS同时检测的方法，明确所产河豚毒素与从河豚体内提取的河豚毒素为同一种物质。本发明所分离的气单胞菌，经培养后可从细菌中大规模分离河豚毒素。

主权项

一种产河豚毒素的气单胞菌Aeromonas molluscorum从暗纹东方鲀Takifugu fasciatus组织分离方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取具河鲀毒素(TTX)的暗纹东方鲀卵巢组织；(2)匀浆处理，并以生理盐水1∶10的比例制成稀释液，取1ml稀释液涂布于TCBS固体培养基上；(3)23℃培养48h，以挑取平板上的特征菌落，划线于另一TCBS固体培养基上；(4)23℃培养24h，再将分离到的单菌落再次划线分离培养，(5)重复划线分离培养，直到分离到单菌落。