[发明专利]一种肝素钠中多硫酸软骨素的分离、检测方法

摘要

本发明公开了一种肝素钠中多硫酸软骨素的分离、检测方法，本发明用快速沉淀法将多硫酸软骨素与肝素钠分离，并进一步对分离所得物通过琼脂糖、电泳进行检测，实现了对肝素钠中含量较低的多硫酸软骨素的检测，灵敏度达到0.1％以上。本发明的电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测、观察，观察直观，容易判断。电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定，且制成干膜可长期保存。

主权项

一种肝素钠中多硫酸软骨素的分离、检测方法，其特征在于包括下列步骤：(1)肝素钠中多硫酸软骨素的分离制备：a、溶解过滤：将含有重量低于0.5％多硫酸软骨素的肝素钠样品，加入氯化钠溶液中，升温至55℃±5℃，搅拌使肝素钠完全溶解，再用碱溶液调PH至10-12，过滤收集滤液，并将滤液降温至溶液的冰点至5℃，用酸调PH至1-2，过滤收集滤液；b、快速沉淀：滤液用碱调PH至5-6，搅拌下缓慢加入酒精，使溶液含酒精的重量浓度为30-38％，静置；用搅拌棒试探容器底部，只要有沉淀沉底，即可以将上层酒精倒出，收集沉淀物，并将其烘干；(2)样品准备：将相同重量的步骤(1)含有重量低于0.5％多硫酸软骨素的肝素钠样品、步骤(1)制得的沉淀物，以及肝素钠标准品、多硫酸软骨素标准品分别溶解于水中；对制得的水溶液分别加酸调PH至1-3，然后用亚硝酸盐或硝酸盐进行硝化反应0.5-2小时，再用碱调PH至6.5-7.5，备用；(3)多硫酸软骨素的检测：c、制胶板：用琼脂糖溶液与电泳缓冲液混合，其混合体积比为1∶0.7-1.5，并加热使其溶解，趁热将胶液倒于大小适宜的玻板上，静置，待凝胶结成无气泡的均匀薄层；d、电泳：在电泳槽内加入电泳缓冲液，将凝胶板置于电泳槽架上，浸入缓冲液；取步骤(1)准备好的四种样品水溶液，于凝胶板负极端分别点样，立即接通电源，在设定的电压梯度、电流强度的条件下电泳；e、染色和脱色：取下凝胶板，用染色液染色，再用水洗去多余的染色液至背景无色为止；f、结果观察：观察样品和标准品所显示的迁移距离。