[发明专利]检测乙肝感染相关基因STR位点的方法、试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种检测与乙肝病毒感染相关的IL-10基因两个STR位点的基因型的方法、试剂盒及应用。所述方法为STRs-PCR，包括模板DNA的制备，两个STR位点的引物设计，PCR扩增体系的组配，PCR循环反应，毛细管电泳及荧光检测并分析PCR产物。与现有技术相比，本发明将IL-10基因两个STR位点与乙肝病毒感染的易感性联系起来，确定了IL-10.G、IL-10.R是乙肝病毒感染的新型相关基因；并采用STRs-PCR方法，通过对IL-10基因IL-10.G和IL-10.R两个STR位点的基因型进行检测，从而可判断个体对乙肝病毒的易感性，为乙肝病毒感染的人群预防和控制提供了新的遗传咨询内容。

主权项

1.一种检测与乙肝病毒感染相关的IL-10基因两个STR位点的基因型的方法，所述方法为STRs-PCR，即短串联重复序列或微卫星DNA聚合酶链式反应，其特征在于：包括以下步骤：(1)采取血样，红细胞悬液经过酚-氯仿抽提基因组DNA后，用TE缓冲液溶解制备模板DNA；(2)IL-10.G与IL-10.R两个STR位点的引物设计：IL-10.R微卫星PCR扩增的引物序列为：5′-CCCTCCAAAATCTATTTGCATAAG-3′、5′-CTCCGCCCAGTAAGTTTCATCAC-3′；IL-10.G微卫星PCR扩增的引物序列为：5′-TTCCTCCCAGTTACAGTCT-3′、5′-CACCATCTCCAGCACATA-3′；(3)PCR扩增体系的组配：10×PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、上游引物G/R、下游引物G/R、Taq DNA聚合酶、模板DNA和去离子水；(4)混匀反应体系，瞬时离心后上机，进行PCR循环反应；(5)ABI310测序仪自动荧光检测并分析PCR产物：向PCR产物中加入去离子甲酰胺进行变性，然后置于ABI 310测序仪中进行毛细管电泳及荧光检测，再用GeneScan软件对产物片段进行准确测定，后利用产物片段大小的数值进行基因分型。