[发明专利]一种生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法

摘要

本发明公开了一种利用含木糖的底物发酵生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法，采用低能离子束诱变的方法，诱变筛选出可以高效利用木糖的高山被孢霉，以葡萄糖和木糖的混合糖作为碳源发酵生产富含花生四烯酸的微生物油脂。本发明利用廉价的木质纤维素水解糖为发酵底物，经产油微生物转化获取油脂，将显著降低微生物油脂生产成本，形成节约耕地、可连续生产的油脂获取路线，并且还有利于环境保护和社会经济可持续发展。

主权项

利用含木糖的底物发酵生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)、原始菌种的活化：将高山被孢霉菌种接种到斜面培养基上在25-30℃下培养7-10天，选取菌丝和孢子生长旺盛的新鲜平板，洗脱下平板孢子，过滤得孢子悬液；(2)、离子束诱变：将孢子悬液涂布于无菌平皿上，风干，进行脉冲式N+离子注入，选用N+离子的能量和剂量分别是10Kev和1.3×1015N+/cm2；然后将离子注入过的孢子悬液用无菌水洗脱后，稀释涂布于木糖筛选平板培养基上在25-30℃下培养，挑选出能在木糖筛选平板培养基上生长且菌丝生长旺盛的的菌落，作为初筛的单菌落，将初筛的单菌落转接斜面培养，接入摇瓶发酵培养转接摇瓶发酵培养基中发酵，挑选出生物量和油脂含量高的菌种作为复筛的结果，然后对复筛的结果重复进行离子束诱变、初筛和复筛过程；所述的木糖筛选平板培养基中主要组分的重量百分含量为：木糖2％，蛋白胨0.5％，酵母膏1.0％，基质蒸馏水，pH8.0，28℃；(3)、液体培养：将离子束诱变、筛选过的菌种于PH值为7.5-8.5液体培养基中在28-30℃下培养18-24小时，液体培养基中主要原料组分的重量百分比为：葡萄糖4-6％、木糖2-5％、蛋白胨0.5-1％、豆粕0.5-1.5％，基质蒸馏水；(4)、扩大培养：将液体培养后的菌种接种于发酵罐中的发酵培养基中在28-30℃下培养10-12天，发酵培养基中原料组分的重量百分比为：葡萄糖4-6％、木糖2-5％、蛋白胨0.5-1％、豆粕0.5-1.5％，基质为蒸馏水；(5)、菌丝体的油脂提取：将扩大培养后得到的菌丝体进行收集，然后进行离心、洗涤、100-110℃干燥、萃取得成品。