[发明专利]一种生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法

权利要求书

1.利用含木糖的底物发酵生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)、原始菌种的活化：将高山被孢霉菌种接种到斜面培养基上在25-30℃下培养7-10天，选取菌丝和孢子生长旺盛的新鲜平板，洗脱下平板孢子，过滤得孢子悬液；

(2)、离子束诱变：将孢子悬液涂布于无菌平皿上，风干，进行脉冲式N⁺离子注入，选用N⁺离子的能量和剂量分别是10Kev和1.3×10¹⁵N⁺/cm²；然后将离子注入过的孢子悬液用无菌水洗脱后，稀释涂布于木糖筛选平板培养基上在25-30℃下培养，挑选出能在木糖筛选平板培养基上生长且菌丝生长旺盛的的菌落，作为初筛的单菌落，将初筛的单菌落转接斜面培养，接入摇瓶发酵培养转接摇瓶发酵培养基中发酵，挑选出生物量和油脂含量高的菌种作为复筛的结果，然后对复筛的结果重复进行离子束诱变、初筛和复筛过程；所述的木糖筛选平板培养基中主要组分的重量百分含量为：木糖2％，蛋白胨0.5％，酵母膏1.0％，基质蒸馏水，pH8.0，28℃；

(3)、液体培养：将离子束诱变、筛选过的菌种于PH值为7.5-8.5液体培养基中在28-30℃下培养18-24小时，液体培养基中主要原料组分的重量百分比为：葡萄糖4-6％、木糖2-5％、蛋白胨0.5-1％、豆粕0.5-1.5％，基质蒸馏水；

(4)、扩大培养：将液体培养后的菌种接种于发酵罐中的发酵培养基中在28-30℃下培养10-12天，发酵培养基中原料组分的重量百分比为：葡萄糖4-6％、木糖2-5％、蛋白胨0.5-1％、豆粕0.5-1.5％，基质为蒸馏水；

(5)、菌丝体的油脂提取：将扩大培养后得到的菌丝体进行收集，然后进行离心、洗涤、100-110℃干燥、萃取得成品。

2.根据权利要求1所述的生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法，其特征在于：所述的斜面培养基中主要原料成分的重量百分份比为：葡萄糖1.5-2.5％，马铃薯浸出液18-22％，琼脂1.5-2％。

3.根据权利要求1所述的生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法，其特征在于：所述的液体培养的摇床转度为180-230rpm，PH值为8，液体培养基中主要原料组分的重量百分比为：葡萄糖5％、木糖3％、蛋白胨0.7％、豆粕1％；所述的扩大培养是将液体培养后的菌种以8-12％的比例接种于发酵罐中，发酵罐的通气量为1.0-1.5L/min，搅拌速度为400-500转/分，发酵罐内PH值为7.5-8.5，温度为28℃，时间为10-12天，发酵培养基中主要原料组分的重量百分比为：葡萄糖5％、木糖3％、蛋白胨0.7％、豆粕1％，基质为蒸馏水，发酵培养基的PH值为7.5-8.5，温度为28℃。

4.根据权利要求1所述的生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法，其特征在于：所述的木糖选用含有五碳糖的木质纤维素水解糖；所述的油脂的萃取选用石油醚、正己烷。