[发明专利]橡胶树子叶胚高效胚性愈伤诱导及再生方法

摘要

本发明涉及一种橡胶树体细胞胚高效胚性愈伤诱导及再生体胚植株的方法，是选择花药或内珠被脱分化愈伤经胚诱导产生的子叶胚为外植体，进行切片处理，然后将切片接种到胚性愈伤诱导培养基上进行暗培养得到脱分化愈伤；将脱分化愈伤接到胚诱导培养基上进行暗培养产生的子叶胚；将子叶胚接到自根苗培养基上进行光培养。本发明在橡胶树花药组培或内珠被组培的基础上利用子叶胚高效胚性愈伤诱导出胚，可大大提高形成子叶胚的效率，而且不受花期、果期及气候等自然条件的制约，具有工艺简单，生产成本低，子叶胚增殖率高，组织培养周期短等特点，具有很大的应用价值，也为橡胶转化体系的建立开创了展新的技术路线。

主权项

一种橡胶树子叶胚高效胚性愈伤诱导及再生方法，其特征在于：包括胚性组织的选取与处理过程、体细胞胚高效胚性愈伤的诱导过程、高效胚性愈伤诱导成胚过程、成熟胚的选取与诱导成苗过程；1)、胚性组织的选取与处理过程：在橡胶树花药或内珠被组织培养的基础上，选择花药或内珠被脱分化愈伤经胚诱导过程产生的新鲜、健康，长1cm以上的子叶胚为外植体，进行切片处理，切成宽2～3mm、长3～5mm的米粒状切片；2)、体细胞胚高效胚性愈伤的诱导过程：将米粒状子叶胚切片接种到胚性愈伤诱导培养基上于26～28℃进行暗培养20～40天；所述胚性愈伤诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，并添加0.5～2ppm2，4-D、0.5～2ppm KT、0～1ppm BA、0～2ppm NAA、0～2ppm ZT、蔗糖70～90g/L、椰子水50ml/L、0.1～2g/L天门冬酰胺和0.1～0.2g/L肌醇；3)、高效胚性愈伤诱导成胚过程：将步骤2得到的脱分化愈伤接到胚诱导培养基上于24～26℃进行暗培养；所述胚诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，其中大量元素减少10～50％，微量元素增加0.5～2倍，并添加0.5～3ppm BA、0.5～3ppm KT、0～0.5ppmNAA、0.2～1ppm GA、0～.5ppm ABA、水解酪氨酸50～300mg/L、加0.1～0.2g/L肌醇、麦芽糖0～20g/L、蔗糖50～70g/L和椰子水50ml/L；4)、成熟胚的选取与诱导成苗过程：选取步骤3诱导产生的健康、完整、高1.5cm以上的子叶胚接到自根苗培养基上于28～30℃进行光培养；所述自根苗培养基是以MS培养基为基础培养基，其中大量元素减少10～30％，并添加0～2ppm BA、0.5～2ppm KT、0.2～1ppm NAA、0.5～1.5ppmGA、糖30～50g/L和椰子水50m1/L。