[发明专利]一种以卷叶贝母鳞片叶为外植体的多倍体鳞茎诱导方法

摘要

本发明公开了一种以卷叶贝母鳞片叶为外植体的多倍体鳞茎诱导方法，该方法创新之处在于所使用的材料是在由鳞片叶诱导产生愈伤组织的基础上，再经预分化培养过程获得了有一定分化特征的紧密愈伤组织，将其切成小块后浸泡于秋水仙素溶液中进行多倍体诱变处理，可大大减轻秋水仙素溶液对处理材料的伤害，提高了卷叶贝母多倍体鳞茎的诱导率。

主权项

一种以卷叶贝母鳞片叶为外植体的多倍体鳞茎诱导方法，其特征在于包括下列步骤：(1)选择卷叶贝母新鲜鳞茎的鳞片叶作为外植体；(2)剥取上述鳞茎内层中无病和无机械损伤的鳞片叶，先用洗衣粉液洗净后于流水下冲洗25～30min，再用2.0％次氯酸钠溶液漂洗12～15min，用清水洗净并吸干水后，将其放入0.1％升汞溶液中消毒7～10min，然后用无菌水冲洗2～3次，再用无菌滤纸吸干表面的水分，最后将其接入诱导愈伤组织的培养基中进行诱导培养，诱导初期采用12～15天的暗培养；(3)将(2)步骤获得的新生、质地较疏松的愈伤组织接入预分化培养基MS+6‑BA2.0mg·L‑1+NAA0.0～0.3mg·L‑1中获得紧密愈伤组织；(4)将(3)步骤获得的卷叶贝母紧密愈伤组织切成小块，浸泡于已过滤灭菌的秋水仙素溶液中，处理后用无菌水洗2～3次，再用无菌滤纸吸干水后，接入不含有秋水仙素的MS+6‑BA1.0mg·L‑1+NAA0.0～0.3mg·L‑1分化培养基中进行诱导培养而获得多倍体鳞茎；上述所有培养基的配制pH值为5.6～6.5、蔗糖30～50g·L‑1、琼脂6.0～7.0g·L‑1；上述培养条件均为温度15～24℃、每天光照8～16小时、光照强度为1000～1800lx。