[发明专利]一种以卷叶贝母鳞片叶为外植体的多倍体鳞茎诱导方法

权利要求书

1.一种以卷叶贝母鳞片叶为外植体的多倍体鳞茎诱导方法，其特征在于包括下列步骤：

(1)选择卷叶贝母新鲜鳞茎的鳞片叶作为外植体；

(2)剥取上述鳞茎内层中无病和无机械损伤的鳞片叶，先用洗衣粉液洗净后于流水下冲洗25～30min，再用2.0％次氯酸钠溶液漂洗12～15min，用清水洗净并吸干水后，将其放入0.1％升汞溶液中消毒7～10min，然后用无菌水冲洗2～3次，再用无菌滤纸吸干表面的水分，最后将其接入诱导愈伤组织的培养基中进行诱导培养，诱导初期采用12～15天的暗培养；

(3)将(2)步骤获得的新生、质地较疏松的愈伤组织接入预分化培养基MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.0～0.3mg·L^-1中获得紧密愈伤组织；

(4)将(3)步骤获得的卷叶贝母紧密愈伤组织切成小块，浸泡于已过滤灭菌的秋水仙素溶液中，处理后用无菌水洗2～3次，再用无菌滤纸吸干水后，接入不含有秋水仙素的MS+6-BA1.0mg·L^-1+NAA0.0～0.3mg·L^-1分化培养基中进行诱导培养而获得多倍体鳞茎；

上述所有培养基的配制pH值为5.6～6.5、蔗糖30～50g·L^-1、琼脂6.0～7.0g·L^-1；

上述培养条件均为温度15～24℃、每天光照8～16小时、光照强度为1000～1800lx。

2.根据权利要求1所述的一种以卷叶贝母鳞片叶为外植体的多倍体鳞茎诱导方法，其特征在于：上述(2)步骤中所采用的诱导愈伤组织的培养基为MS+6-BA0.1～2.0mg·L^-1+IAA0.4～1.5mg·L^-1+蔗糖30～50g·L^-1+琼脂6.0～7.0g·L^-1。

3.根据权利要求1所述的一种以卷叶贝母鳞片叶为外植体的多倍体鳞茎诱导方法，其特征在于：上述(2)步骤中所采用的诱导愈伤组织的培养基为MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.4～1.0mg·L^-1+蔗糖30～50g·L^-1+琼脂6.0～7.0g·L^-1。

4.根据权利要求1所述的一种以卷叶贝母鳞片叶为外植体的多倍体鳞茎诱导方法，其特征在于：上述(4)步骤中所采用的秋水仙素浓度为0.01～0.22％，处理时间为6～72h。