[发明专利]一种ELP融合蛋白及其应用

摘要

本发明公开了一种含ELP的融合蛋白以及相关的一系列应用，包括一种无标签的重组蛋白的表达纯化的方法、一种无标签的重组蛋白、一种表达纯化含ELP的融合蛋白的方法、一种用于蛋白表达纯化的试剂盒、一种具有固定化酶特性的可循环利用的酶以及一种利用包含ELP的蛋白酶进行循环酶切纯化的方法，本发明利用ELP所具有的反温度相变的特性，解决了蛋白表达量低或形成不可溶包含体的问题，而且在蛋白纯化中不需要利用复杂的纯化操作。另外，将含ELP的融合蛋白作为固相酶来用，避免了固相酶的劣势，且能便于生产连续化、自动化，以实现工业化大规模生产。

主权项

1、一种无标签的重组蛋白的表达纯化的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)连接目标蛋白基因与含有ELP的融合伴侣的基因成为融合蛋白基因，并表达得到融合蛋白A，其中所述融合蛋白A在所述ELP与所述含有ELP的融合伴侣的连接处至少有一个蛋白酶酶切位点；(2)将步骤(1)得到的融合蛋白A与一种含有ELP的融合蛋白酶B混合，所述的融合蛋白酶B能作用于融合蛋白A的酶切位点，但不作用于自身；(3)让步骤(2)的混合物相互作用，其中融合蛋白酶B将融合蛋白A降解成为含ELP的融合伴侣和目标蛋白；(4)改变步骤(3)的混合溶液的温度、盐离子浓度或pH中的至少一个条件，待出现聚集体后，离心，取上清溶液即为纯化的目标蛋白。