[发明专利]一种ELP融合蛋白及其应用

权利要求书

1、一种无标签的重组蛋白的表达纯化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)连接目标蛋白基因与含有ELP的融合伴侣的基因成为融合蛋白基因，并表达得到融合蛋白A，其中所述融合蛋白A在所述ELP与所述含有ELP的融合伴侣的连接处至少有一个蛋白酶酶切位点；

(2)将步骤(1)得到的融合蛋白A与一种含有ELP的融合蛋白酶B混合，所述的融合蛋白酶B能作用于融合蛋白A的酶切位点，但不作用于自身；

(3)让步骤(2)的混合物相互作用，其中融合蛋白酶B将融合蛋白A降解成为含ELP的融合伴侣和目标蛋白；

(4)改变步骤(3)的混合溶液的温度、盐离子浓度或pH中的至少一个条件，待出现聚集体后，离心，取上清溶液即为纯化的目标蛋白。

2、根据权利要求1所述的无标签的重组蛋白的表达纯化的方法，其特征在于，所述的ELP的单体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3、根据权利要求1所述的无标签的重组蛋白的表达纯化的方法，其特征在于，所述的ELP为ELP单体的四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体或九聚体。

4、根据权利要求1所述的无标签的重组蛋白的表达纯化的方法，其特征在于，所述融合蛋白酶B包括ELP-3C或ELP-SUMO蛋白酶。

5、一种无标签的重组蛋白，其特征在于，其是通过以下方法得到的：

(1)连接目标蛋白基因与含有ELP的融合伴侣的基因成为融合蛋白基因，并表达得到融合蛋白C，其中所述融合蛋白C在所述ELP与所述含有ELP的融合伴侣的连接处至少有一个蛋白酶酶切酶切位点；

(2)将步骤(1)得到的融合蛋白C与一种含有ELP的融合蛋白酶D混合，所述的融合蛋白酶D能作用于融合蛋白C的酶切位点，但不作用于自身；

(3)让步骤(2)的混合物相互作用，其中融合蛋白酶D将融合蛋白C降解成为含ELP的融合伴侣和目标蛋白；

(4)改变步骤(3)的混合溶液的温度、盐离子浓度或pH中的至少一个条件，待出现聚集体后，离心，取上清溶液即为纯化的目标蛋白。

6、一种含ELP的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括弹性蛋白样多肽(ELP)和至少一种目的蛋白或多肽，所述目的蛋白或多肽能以与ELP形成的融合蛋白的形式进行表达，所述融合蛋白能在不同的温度、不同的盐离子浓度或不同的pH值中的至少一个不同的条件下处于溶解或沉淀状态，并且所述融合蛋白能通过调节温度、盐离子浓度或pH值得以纯化。

7、一种表达纯化含ELP的融合蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)连接目标蛋白基因与含有ELP的融合伴侣的基因成为融合蛋白基因，并表达得到融合蛋白E；

(2)改变步骤(1)得到的融合蛋白E所处的温度、盐离子浓度或pH值中的至少一个条件，待出现聚集体后，离心，所得聚集体即为含ELP的融合蛋白。

8、一种用于蛋白表达纯化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括含ELP的质粒，所述含ELP的质粒用于制备融合蛋白F和融合蛋白G，所述融合蛋白G含有目标蛋白或多肽，所述融合蛋白F能将所述融合蛋白G通过酶切，得到目标蛋白或多肽。

9、一种具有固定化酶特性的可循环利用的酶，其特征在于，所述酶为包含ELP的融合蛋白酶，所述ELP能根据温度、盐离子浓度或pH值处于溶解或沉淀状态。

10、一种利用包含ELP的蛋白酶进行循环酶切纯化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将融合蛋白酶与底物混合，进行酶切反应；

(2)调整酶切反应后的溶液的温度、盐离子浓度或pH值，待出现聚集体后离心；

(3)将离心后得到的聚集体加入酶解液，待其溶解后，加入底物，进行酶切反应，重复步骤(2)。