[发明专利]一种高效香蕉胚性愈伤诱导和继代增殖再生的方法

摘要

本发明公开了一种高效香蕉胚性愈伤组织诱导和继代增殖再生的方法，其工艺过程包括诱导脱分化愈伤组织的培养过程、诱导易碎胚性愈伤组织的培养过程、易碎胚性愈伤组织的继代增殖过程、胚性愈伤组织的诱导成胚过程、成熟胚诱导成苗过程。本发明工艺流程简单，生产成本低，胚性组织诱导和增殖率高，可继代时间长，克服了香蕉组织培养过程中，外植体的胚性反应低，胚性愈伤组织诱导难，诱导成胚率和成苗率低，以及诱导周期长等技术难题，为香蕉转化技术提供了新的技术路线，也为生产幼态组织培养香蕉苗提供了高效再生体系，具有很大的应用价值。

主权项

1、一种高效香蕉胚性愈伤组织诱导和继代增殖再生的方法，其特征在于：包括诱导脱分化愈伤组织的培养过程、诱导易碎胚性愈伤组织的培养过程、易碎胚性愈伤组织的继代增殖过程、胚性愈伤组织的诱导成胚过程、成熟胚诱导成苗过程；1)诱导脱分化愈伤组织的培养过程选取香蕉刚出土的无病幼嫩吸芽经表面处理后，剥取顶芽切成厚1～2mm，长宽0.5～1cm的薄片，接种到脱分化愈伤组织诱导培养基上进行暗培养得到白色脱分化愈伤组织，培养温度为25～30℃，培养时间20～30天；所述脱分化愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，激素为0.5～4ppm 2、4-D、0～1ppm IAA、0～1ppm NAA、0～0.5ppm ZT，并添加谷氨酸50～100mg/L，Vc0.05～0.5mg/L，PH 5.3～5.8；2)诱导易碎胚性愈伤组织的培养过程将经脱分化愈伤诱导过程产生的白色脱分化愈伤组织，接到胚性愈伤组织诱导培养基上进行暗培养即能从脱分化愈伤上再生黄色松散的易碎胚性愈伤组织，培养温度为24～28℃，培养时间40～50天；所述胚性愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，其中大量元素减少20～50％，微量元素增加1～3倍，激素为0.2～2ppm 2、4-D、0～0.5ppm ZT、0～4ppm Picloram，并添加糖40g/L、谷氨酸50～100mg/L，Vc0.05～0.5mg/L，PH 5.3～5.8；3)易碎胚性愈伤组织的继代增殖过程将易碎胚性愈伤组织接到继代增殖培养基上进行暗培养，可对易碎胚性愈伤组织进行继代和增殖，培养温度为26～30℃，每20～30天继代一次；所述继代增殖培养基是以MS培养基为基础培养基，其中微量元素增加1～3倍，激素为0.2～2ppm 2、4-D、0～1ppm NAA、0～0.5ppm ZT、0～4ppm Picloram，并添加糖40g/L、谷氨酸50～100mg/L、Vc0.05～0.5mg/L，PH 5.3～5.8；4)胚性愈伤组织的诱导成胚过程将继代增殖的胚性愈伤组织接到胚诱导培养基上进行暗培养，诱导形成成熟胚，培养温度为25～28℃，每15～20天继代一次；所述胚诱导培养基是以MS培养基为基础培养基，其中大量元素减少20～50％，微量元素增加1～3倍，激素为0～2ppm 2、4-D、0.2～0.5ppmZT、0～3ppm TDZ、0～0.5ppm GA3，并添加糖20g/L、谷氨酸50～100mg/L、Vc0.05～0.5mg/L，PH 5.3～5.8；5)成熟胚诱导成苗过程挑取经诱导成胚过程的成熟胚，接到成苗培养基上进行培养能逐步诱导成苗，培养温度为26～30℃，光照时间为16h，光照强度为1000 1x，每20～30天继代一次；所述成苗培养基是以MS培养基为基础培养基，激素为0～0.5ppm NAA、1～5ppm 6-BA，并添加糖30g/L，PH5.3～5.8。