[发明专利]一种从王不留行中分离制备具有增乳活性单体的方法

摘要

本发明的目的在于提供一种制备方法简便、纯度高、成本低的从王不留行中分离制备具有增乳活性单体的方法。方法步骤包括：王不留行粗提取、王不留行提取物活性部位的筛选、王不留行增乳单体的制备、增乳单体的结构鉴定，鉴定结果确定目的化合物为邻苯二甲酸二丁酯；制备出的邻苯二甲酸二丁酯可以促进体外培养的奶牛乳腺上皮细胞乳糖和β-酪蛋白的分泌水平；本发明一种从王不留行中分离制备具有增乳活性单体的方法，在提取过程中采用的乙醇等有机溶剂的成本低廉、无毒、可以回收。采用的聚酰胺柱层析和硅胶柱层析可以扩大规模化生产，从而可以获得大量的增乳成分。对于王不留行中药资源的开发具有一定的意义，也必然会带来一定的经济效益。

主权项

1.一种从王不留行中分离制备具有增乳活性单体的方法，其特征在于：方法步骤如下：步骤一：王不留行粗提取：取王不留行粗粉10kg，用体积分数70％的乙醇加热回流提取3次，每次2h，减压回收溶剂，稀释母液，依次以乙醚、乙酸乙酯萃取，获得乙酸乙酯萃取部位；步骤二：王不留行提取物活性部位的筛选：对乙酸乙酯部位进行聚酰胺柱层析，干法上样，分别用水，10％，30％，50％，70％，95％乙醇系统进行梯度洗脱，收集不同梯度洗脱液，旋转蒸发后获得不同洗脱部位的中药成分，通过其对奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型细胞活力、乳糖及乳蛋白分泌能力的影响确立50％的乙醇洗脱部位为王不留行增乳活性部位；步骤三：王不留行增乳单体的制备：对50％的有效部位进行进一步的分离纯化，对聚酰胺柱层析分离获得的50％乙醇洗脱部位进行硅胶薄层层析，根据硅胶G板的薄层结果的Rf值情况选择摸索不同的溶剂系统，最终确立石油醚-乙酸乙酯系统为有效分离系统，采用石油醚-乙酸乙酯系统对50％乙醇洗脱部位进行硅胶柱层析，对分离的化合物进行筛选，其中石油醚：乙酸乙酯20∶1的洗脱流分中含有一个具有增乳活性的单体成分；对该增乳单体化合物的制备采用分析型和制备型HPLC法进行，采用10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％的甲醇对单体化合物的粗品进行紫外全波长扫描进行检识，确立此化合物的紫外吸收波长为275nm，采用半制备型HPLC对化合物连续进样以纯化并制备出高纯度的目的化合物；步骤四：增乳单体的结构鉴定：采用紫外光谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱、高分辨电喷雾质谱(HR-ESI-MS)对目的化合物进行结构鉴定，以确定目的化合物的分子量、分子式及其具体结构形式，鉴定结果确定目的化合物为邻苯二甲酸二丁酯；制备出的邻苯二甲酸二丁酯可以促进体外培养的奶牛乳腺上皮细胞乳糖和β-酪蛋白的分泌水平；且邻苯二甲酸二丁酯制备的中药单体注射液的动物试验结果表明其可以促进小鼠和奶牛产奶量的提高。