[发明专利]一种碱性橙Ⅱ完全抗原的合成方法

摘要

一种碱性橙II完全抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以碱性橙II为半抗原，用重氮化法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了碱性橙II完全抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原，可以满足国内对其研究的需要。

主权项

1、一种碱性橙II完全抗原的合成方法，其特征是以碱性橙II为半抗原，用重氮化法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比；步骤为：(1)碱性橙II完全抗原的合成：配制A液：10mg碱性橙II溶于4mL 0.5mol/L HCl溶液中，在冰浴条件下加入1mol/L NaNO2，直到淀粉碘化钾试纸变蓝，反应30min，4℃下保存备用；配制B液：30mg牛血清蛋白BSA溶于3mL pH 9.6碳酸盐缓冲液中，4℃下保存备用；冰浴条件下将A液逐滴加入B液中，过程中保持pH 9.0，然后置4℃下温孵3h，即得碱性橙II完全抗原混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；透析：将碱性橙II完全抗原混合液移入透析袋中，用2×2L的0.01mol/L的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液和2×2L的去离子水透析3天，最后使用冷冻干燥法将透析袋中的液体制成粉末，即得到碱性橙II完全抗原；(2)碱性橙II完全抗原的鉴定：碱性橙II完全抗原采用分光光度法鉴定其偶联结果，利用牛血清蛋白标准液得到标准曲线，从曲线上比对得到抗原溶液的蛋白浓度，计算摩尔吸收系数ε，再测定碱性橙II完全抗原的偶联比。