[发明专利]一种适用于荧光偏振技术检测基因甲基化的方法

摘要

本发明涉及荧光偏振检测技术领域，具体涉及一种适用于荧光偏振技术中检测基因甲基化的方法。本发明为克服现有技术存在的操作步骤繁琐、成本高、和效率低的问题，现采用的技术方案是：一种适用于荧光偏振技术检测基因DNA甲基化的方法，是对下述的试剂进行扩增：所采用的试剂由MgCl2，10×反应缓冲液，dNTPs，TaqDNA聚合酶，靶基因启动子区CpG岛非甲基化区引物，靶区域甲基化及非甲基化序列的3’端带荧光标记的DNA探针组成；与现有技术相比，本发明的优点是：1、开辟了新平台；2、全面准确；3、本方法步骤简单，操作简单；4、结果分析简单。

主权项

一种适用于荧光偏振技术检测基因DNA甲基化的方法，是对下述的试剂进行扩增：所采用的试剂由MgCl2，10×反应缓冲液，dNTPs，TaqDNA聚合酶，靶基因启动子区CpG岛非甲基化区引物，靶区域甲基化及非甲基化序列的3’端带荧光标记的DNA探针组成；所采用的PCR扩增试剂包括10倍的PCR缓冲液；浓度各为2.0～2.5mmol/L的dGTP、dCTP、dATP和dTTP，浓度为0.05-0.2μmol/L的靶基因的启动子区CpG岛非甲基化区上游引物及3’端带荧光标记的探针、浓度为0.5-2μmol/L的靶基因的下游引物以及1-5U/μl的TaqDNA聚合酶，其中上游引物与下游引物浓度之比为5～10∶1；所述扩增反应条件是：94-95℃变性4-10min后，95℃孵育5-40秒，55-65℃孵育10-60秒，72℃孵育10-40秒，35-45个循环，最后一个循环无72℃孵育。