[发明专利]一种用GDF5基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法

摘要

本发明公开了一种用GDF5基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法，该方法根据牛GDF5基因序列设计一对引物；利用该引物对牛的基因组DNA进行PCR扩增；并利用限制性内切酶Mva I消化扩增的PCR产物；然后使用2.5％的琼脂糖凝胶对消化后的PCR产物进行电泳分离，检测出GDF5基因外显子1的586位点处的T/C变异位点；分别对牛GDF5基因外显子1中变异位点为C碱基、T碱基及T/C杂合碱基进行命名。根据实验结果表明，具有TT基因型个体的体长比CC基因型个体的体长低5.64～6.87cm；具有TT基因型个体的腰角宽比CC基因型个体的腰角宽低3.46～4.00cm。该方法操作简单、费用低、精确度高，可进行快速检测。

主权项

1、一种用GDF5基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法，其特征在于，包括下列步骤：步骤一，根据牛GDF5基因(GenBank登录号：NC_007311)序列设计一对引物GDFF和GDFR：GDFF：5’TGT CCG ATG CTG ACA GAA AGG 3’(如序列表中序列2所示)GDFR：5’GAG TGA GGT TAA TCC CAG ATA CCA 3’(如序列表中序列3所示)步骤二，利用该对引物GDFF和GDFR对牛的基因组DNA进行PCR扩增，得到由GDFF和GDFR表示的引物扩增的第一外显子区和第一内含子区的扩增片段，该扩增片段的长度为235bp；步骤三，利用限制性内切酶Mva I消化扩增的PCR产物；步骤四，用浓度为2.5％的琼脂糖凝胶对消化后的PCR产物进行电泳分离，检测出GDF5基因外显子1的586位点处的T/C变异位点；步骤五，通过T/C变异位点检测碱基的突变，并根据基因多态性部位分成下面3种基因型：当T/C变异位点为C碱基时，会产生限制性内切酶Mva I的酶切位点即CC^TGG，Mva I消化PCR产物后会产生的2个片段即181bp和54bp，将其命名为CC基因型；当T/C变异位点为T碱基即CTTGG时，则不存在Mva I酶切位点，Mva I消化PCR产物后只有1个片段即235bp，将其命名为TT基因型或野生型；当T/C变异位点为T/C杂合时，Mva I消化PCR产物后会产生3个片段即235bp、181bp和54bp，将其命名为TC基因型。