[发明专利]一种用GDF5基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法

权利要求书

1.一种用GDF5基因预示和鉴定秦川牛体尺大小的分子标记方法，其特征在于，所述秦川牛体尺大小包括体长和腰角宽，具体按下列步骤进行：

步骤一，根据牛GDF5基因GenBank登录号：NC 007311序列设计一对引物GDFF和GDFR：

GDFF：5’TGT CCG ATG CTG ACA GAA AGG 3’；

GDFR：5’GAG TGA GGT TAA TCC CAG ATA CCA 3’；

步骤二，利用该对引物GDFF和GDFR对牛的基因组DNA进行PCR扩增，得到由GDFF和GDFR表示的引物扩增的第一外显子区和第一内含子区的扩增片段，该扩增片段的长度为235bp；

所述的由GDFF和GDFR表示的引物扩增的第一外显子区和第一内含子区的扩增片段的基因序列如下：

TGTCCGATGCTGACAGAAAGGGAGGCAACAGCAGCGTGAAGTTGGAGGCT  50

GGCNTGGCCAACACCATCACCAGCTTTATTGACAAAGGGCAAGGTGAGGG  100

GGCGGGGTGGCTGGGGCACGGCTCAGAGGGAGGGGCATCTGCATGCATGG  150

AGGGGGCTTTAGAGCCCAGACACTGCACTGGGGGGAGATG GTGTGTGCTT 200

CTGGCCCGGGGTGGTATCTGGGATTAACCTCACTC；

步骤三，利用限制性内切酶Mva I消化扩增片段；

步骤四，用浓度为2.5％的琼脂糖凝胶对消化后的扩增片段进行电泳分离，检测出步骤二的扩增片段的第54位的T/C变异位点；

步骤五，通过T/C变异位点检测碱基的突变，并根据基因多态性部位分成下面3种基因型：

当T/C变异位点为C碱基时，会产生限制性内切酶Mva I的酶切位点即CC^TGG，Mva I消化扩增片段后会产生2个片段即181bp和54bp，将其命名为CC基因型；

当T/C变异位点为T碱基即CTTGG时，则不存在Mva I酶切位点，Mva I消化扩增片段后只有1个片段即235bp，将其命名为TT基因型或野生型；

当T/C变异位点为T/C杂合时，Mva I消化扩增片段后会产生3个片段即235bp、181bp和54bp，将其命名为TC基因型；

TT基因型个体的体长和腰角宽显著低于TC和CC基因型个体的体长和腰角宽。