[发明专利]一种利用微卫星标记技术鉴别肉制品中源性成份的方法

摘要

本发明涉及一种利用微卫星标记技术鉴别肉制品中动物源性成份的方法，属于生物高技术领域。利用微卫星标记技术鉴别肉制品中牛、羊、猪、狗、鸡、鸭源性成份，包括肉制品中基因组DNA的提取，进行PCR反应，PCR产物的检测以及引物筛选、样品鉴定。该方法筛选种间特异、种内通用的微卫星标记，设计特异性引物，建立PCR检测方法，根据扩增产物片段大小及有无鉴别肉制品中牛、羊、猪、狗、鸡、鸭源性成份。该方法具有快速、简单、准确、特异性强、灵敏度高的特点。适合在检测大批量样品方面推广使用。对于防止疯牛病传入我国、防止不法商家瞒报商品成份，保证国家的安全和人民的健康，都具有非常重要的意义。

主权项

1. 一种利用微卫星标记技术鉴别肉制品中源性成份的方法，其特征在于：(1)肉制品中基因组DNA的提取：使用血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取肉制品中基因组DNA；(2)以肉制品中基因组DNA作为模板，进行PCR反应，25μL反应体系：2×PCRMix12.5μL，10μmol/L上、下游引物各1μL，模板DNA1μL，补水至25μL；程序：94℃，预变性2min。94℃变性15s，55℃退火30s，68℃延伸1min，重复10个循环；94℃变性15s，50℃退火30s，68℃延伸1min，重复10个循环；94℃变性15s，45℃退火30s，68℃延伸1min，重复10个循环；68℃延伸5min；(3)PCR产物的检测：取PCR产物7μL，采用质量比2.0％的琼脂糖凝胶(含0.005％的GOLDView)电泳，电泳缓冲液为0.5×TBE，120V恒压电泳40min，紫外灯下观察电泳结果；(4)样品鉴定：肉制品中，其牛源性成份所用引物为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，扩增结果如果不出现322bp条带，说明没有牛源性成份的存在；如果出现322bp条带，再用引物SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4进行扩增，扩增结果如果不出现679bp条带，则说明有牛源性成份存在；如果出现679bp条带，则说明没有牛源性成份存在；其羊源性成份所用引物为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4，扩增结果如果不出现679bp条带，说明没有羊源性成份的存在；如果出现679bp条带，则说明有羊源性成份存在；其猪源性成份所用引物为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6，扩增结果如果不出现600bp条带，说明没有猪源性成份的存在；如果出现600bp条带，则说明有猪源性成份存在；其狗源性成份所用引物为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，扩增结果如果不出现437bp条带，说明没有狗源性成份的存在；如果出现437bp条带，则说明有狗源性成份存在；其鸡源性成份所用引物为SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10，扩增结果如果不出现261bp条带，说明没有鸡源性成份的存在；如果出现261bp条带，则说明有鸡源性成份存在；其鸭源性成份所用引物为SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12，扩增结果如果不出现572bp条带，说明没有鸭源性成份的存在；如果出现572bp条带，则说明有鸭源性成份存在。