[发明专利]一种利用微卫星标记技术鉴别肉制品中源性成份的方法无效
| 申请号： | 200810243974.7 | 申请日： | 2008-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN101435001A | 公开（公告）日： | 2009-05-20 |
| 发明（设计）人： | 杨德吉;杨静静;许家荣;姚大伟;周光宏;徐幸莲;郑新 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210095江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 卫星 标记 技术 鉴别 肉制品 中源性 成份 方法 | ||
1.一种利用微卫星标记技术鉴别肉制品中源性成份的方法，其特征在于：
(1)肉制品中基因组DNA的提取：使用血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取肉制品中基因组DNA；
(2)以肉制品中基因组DNA作为模板，进行PCR反应，
25μL反应体系：2×PCRMix12.5μL，10μmol/L上、下游引物各1μL，模板DNA 1μL，补水至25μL；
程序：94℃，预变性2min。94℃变性15s，55℃退火30s，68℃延伸1min，重复10个循环；94℃变性15s，50℃退火30s，68℃延伸1min，重复10个循环；94℃变性15s，45℃退火30s，68℃延伸1min，重复10个循环；68℃延伸5min；
(3)PCR产物的检测：取PCR产物7μL，采用质量比2.0％的琼脂糖凝胶(含0.005％的GOLDView)电泳，电泳缓冲液为0.5×TBE，120V恒压电泳40min，紫外灯下观察电泳结果；
(4)样品鉴定：肉制品中，
其牛源性成份所用引物为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，扩增结果如果不出现322bp条带，说明没有牛源性成份的存在；如果出现322bp条带，再用引物SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4进行扩增，扩增结果如果不出现679bp条带，则说明有牛源性成份存在；如果出现679bp条带，则说明没有牛源性成份存在；
其羊源性成份所用引物为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4，扩增结果如果不出现679bp条带，说明没有羊源性成份的存在；如果出现679bp条带，则说明有羊源性成份存在；
其猪源性成份所用引物为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6，扩增结果如果不出现600bp条带，说明没有猪源性成份的存在；如果出现600bp条带，则说明有猪源性成份存在；
其狗源性成份所用引物为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，扩增结果如果不出现437bp条带，说明没有狗源性成份的存在；如果出现437bp条带，则说明有狗源性成份存在；
其鸡源性成份所用引物为SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10，扩增结果如果不出现261bp条带，说明没有鸡源性成份的存在；如果出现261bp条带，则说明有鸡源性成份存在；
其鸭源性成份所用引物为SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12，扩增结果如果不出现572bp条带，说明没有鸭源性成份的存在；如果出现572bp条带，则说明有鸭源性成份存在。
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