[发明专利]来自海洋的多粘类芽孢杆菌产中性蛋白酶及其方法

摘要

本发明是一种来自海洋的多粘类芽孢杆菌L₁-9(Paenibacillus polymyxaisolate L₁-9)产中性蛋白酶方法，其步骤包括菌株活化、种子液的制备、产酶培养基的制备和产酶发酵培养和粗酶液的制备。该方法所产中性蛋白酶的适合反应温度为40℃，pH值为7.0；该酶在50℃以下保温20min有酶活性，在60℃以上酶活性减弱；在pH值5.0～7.0时稳定，在pH值4.0以下或9.0以上时酶活下降；金属离子Ag⁺、Zn²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺能抑制蛋白酶的活性，而Na⁺、K⁺能提高蛋白酶活性。

主权项

1、一种来自海洋的多粘类芽孢杆菌L1-9(Paenibacillus polymyxa isolateL1-9)产中性蛋白酶方法，其特征在于，其步骤如下：(1)菌株活化：在超净台无菌操作条件下，取多粘类芽孢杆菌L1-9(Paenibacillus polymyxa isolate L1-9)菌株，划线接种到PDA斜面培养基上25℃下恒温培养24h；所述的PDA斜面培养基的组成为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15-20g，海水1000ml；(2)种子液的制备：在无菌条件下将5ml PD液体培养基加入到步骤(1)所述活化好的多粘类芽孢杆菌L1-9(Paenibacillus polymyxa isolate L1-9)PDA斜面上，冲洗下菌苔并倒入装有45mlPD液体培养基的250ml三角瓶中，25℃，190r/min的条件，振荡培养24h，得种子液；所述的PD液体培养基的组成为：马铃薯200g，葡萄糖20g，海水1000ml；(3)产酶培养基的制备：用海水按豆饼粉2％、麸皮3％、玉米粉4％、Na2HPO4·12H2O 0.4％、KH2PO4 0.03％、CaCl2 0.1％、NaCO3·10H2O0.1％的重量百分比配制成产酶液体培养基，调节pH值为6.0，分装在500mL三角瓶中，每瓶装液量为70mL，121.5℃灭菌20min；(4)产酶培养和粗酶液的制备：在无菌条件下按5％的接种量将种子液接种到产酶液体培养基中，在温度为25℃、转速为190r/min条件下，振荡培养42h；将培养后的菌液在4℃、10000r/min条件下，离心20min，收集上清液即得粗酶液。