[发明专利]一种利用60Coγ射线辐照获得丁醇高产株的方法

摘要

一种利用⁶⁰Coγ射线辐照获得丁醇生产高产株的方法，属于生物化工技术领域。采用⁶⁰Coγ射线对丁醇生产菌细胞或其原生质体进行辐照，获得丁醇高产株。其优点在于，操作简单，辐照原生质体正变率高，可显著提高菌株的丁醇生产能力，降低丁醇生产成本。

主权项

1.一种利用60Co γ射线辐照获得丁醇生产高产株的方法，其特征在于，工艺步骤包括：(1)细胞悬液的制备将斜面培养基上培养好的丁醇产生菌用无菌水洗下，显微镜计数调节细胞浓度为5-7×106个/mL；(2)原生质体的制备将斜面培养基上培养好的丁醇产生菌接种于完全培养基，30-37℃静置培养18-24h，添加0.1-0.3％甘氨酸和20-30u/ml青霉素处理2-3h后3000-5000r/min离心5-10min，缓冲液洗涤菌体；收集处理后的菌体悬浮于原生质体稳定液中，加入2-4mg/mL溶菌酶，30-37℃保温6-8h后终止酶解，3000-5000r/min，离心5-10min，收集原生质体；(3)60Co γ射线辐照诱变将制备的细胞悬液或原生质体悬浮于高渗缓冲液中，用60Co γ射线辐照，辐照剂量100-1000Gy，剂量率3-5Gy/min，诱变后稀释10-3～10-6涂布于完全培养基上，于30-35℃黑暗条件下避光培养2-3d；(4)高产株的筛选选取致死率在90％以上的辐照剂量辐照的菌株30-37℃有氧培养48-72h后测定丁醇产量，筛选高产菌株。