[发明专利]一种利用60Coγ射线辐照获得丁醇高产株的方法

权利要求书

1.一种利用⁶⁰Co γ射线辐照获得丁醇生产高产株的方法，其特征在于，工艺步骤包括：

(1)细胞悬液的制备

将斜面培养基上培养好的丁醇产生菌用无菌水洗下，显微镜计数调节细胞浓度为5-7×10⁶个/mL；

(2)原生质体的制备

将斜面培养基上培养好的丁醇产生菌接种于完全培养基，30-37℃静置培养18-24h，添加0.1-0.3％甘氨酸和20-30u/ml青霉素处理2-3h后3000-5000r/min离心5-10min，缓冲液洗涤菌体；收集处理后的菌体悬浮于原生质体稳定液中，加入2-4mg/mL溶菌酶，30-37℃保温6-8h后终止酶解，3000-5000r/min，离心5-10min，收集原生质体；

(3)⁶⁰Co γ射线辐照诱变

将制备的细胞悬液或原生质体悬浮于高渗缓冲液中，用⁶⁰Co γ射线辐照，辐照剂量100-1000Gy，剂量率3-5Gy/min，诱变后稀释10^-3～10^-6涂布于完全培养基上，于30-35℃黑暗条件下避光培养2-3d；

(4)高产株的筛选

选取致死率在90％以上的辐照剂量辐照的菌株30-37℃有氧培养48-72h后测定丁醇产量，筛选高产菌株。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述丁醇产生菌为丙酮丁醇梭菌Clostridium acetobutylicum、糖-醋丁基梭菌Clostridium saccharo-acetoburylicum、费地浸麻梭状芽孢杆菌Cl.felsineum或丁基梭状芽孢杆菌Cl.butylicum。

3、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述完全培养基为：

完全培养基g/L：酵母浸粉3.0，牛肉膏10.0，胰蛋白胨10.0，可溶性淀粉1.0，葡萄糖5.0，L-半胱氨酸0.50，NaCI 5.0，NaAc 3.0，琼脂粉15，pH8.5。

4、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述高渗缓冲液的成份为：0.1mol/L pH 6.0磷酸缓冲液，0.8mol/L甘露醇。