[发明专利]一种核酸等温扩增检测结核分枝杆菌活菌的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种核酸等温扩增检测结核分枝杆菌活菌的方法及其试剂盒，检测步骤依次包括：结核分枝杆菌mRNA模板在60～70℃下解链后降温；加入逆转录酶、核糖核酸酶H、RNA聚合酶，在引物的引导下于37～42℃进行等温扩增，获得RNA扩增子；然后利用纳米金探针和捕获探针检测扩增子，通过层析杂交显色反应获得检测结果。杂交膜出现显色条带为mRNA阳性(有活菌存在)，无条带为阴性。采用本方法的试剂盒可检测结核分枝杆菌活菌，具有准确灵敏、简便快速等优点，能克服已有方法鉴定时间长、操作复杂、特异性低等不足，可作为结核病诊断和预防、治疗疗效观察、抗结核药物筛选和敏感性实验等相关研究的辅助实验手段。

主权项

一种结核分枝杆菌核酸等温扩增检测活菌的方法，采用逆转录-转录和纳米金探针检测层析杂交原理，其扩增对象为从痰液、活检组织等样本或结核杆菌培养物中提取获得的RNA模板；其特征在于，RNA模板通过采用逆转录酶、核糖核酸酶H以及RNA聚合酶等温扩增，产生的大量RNA扩增子和纳米金颗粒标记的检测探针、生物素(或地高辛)标记的捕获探针结合形成杂交复合物引起光学性质变化，最后该复合物和固定在层析膜上亲和素(或抗地高辛抗体)结合形成显色检测条带。