[发明专利]以rhDSL重组蛋白扩增造血干细胞及祖细胞的方法无效

专利信息
申请号: 200810200654.3 申请日: 2008-09-27
公开(公告)号: CN101363012A 公开(公告)日: 2009-02-11
发明(设计)人: 韩伟;赵梅 申请(专利权)人: 上海交通大学
主分类号: C12N5/08 分类号: C12N5/08;C12N15/12;C12N15/70;C07K14/47
代理公司: 上海交达专利事务所 代理人: 王锡麟;王桂忠
地址: 200240*** 国省代码: 上海;31
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摘要: 发明涉及一种生物工程领域的以rhDSL重组蛋白扩增造血干细胞及祖细胞的方法,在HS/PCs体外培养体系中加入rhDSL重组蛋白及早期造血因子,采用这两者结合扩增造血干细胞和祖细胞。所述rhDSL重组蛋白为含有6×His标签的Notch配体Delta-like-1的衍生多肽,衍生多肽由含有进化中的保守结构区DSL和与之相邻的N-端50个氨基酸构成,共99个氨基酸,其氨基酸序列为:LHTDSPDDLATE NPERLISRLATQRHLTVGEEWSQDLHSSGRTDLKYSYRFVCDEHYYGEGCSVFCRPRDDAFGHFTCGERGEKVCNPGWKGPYCTEPI。本发明中rhDSL重组蛋白在造血干/祖细胞扩增中具有分子量小,使用方便,节约成本的特点。
搜索关键词: rhdsl 重组 蛋白 扩增 造血 干细胞 细胞 方法
【主权项】:
1、一种以rhDSL重组蛋白扩增造血干细胞及祖细胞的方法,其特征在于,包括如下步骤:第一步,rhDSL重组蛋白的制备:首先构建rhDSL的重组表达质粒pQE30-hDSL,然后以大肠杆菌DH5α为宿主表达rhDSL,并采用Q Sepharose阴离子交换层析与金属离子Ni2+亲和层析相结合的纯化方法进行rhDSL重组蛋白的纯化,得到rhDSL重组蛋白;所述rhDSL重组蛋白为含有6×His标签的Notch配体Delta-like-1的衍生多肽,所述的衍生多肽由含有进化中的保守结构区DSL和与之相邻的N-端的50个氨基酸构成,共99个氨基酸,其氨基酸序列为:LHTDSPDDLATENPERLISRLATQRHLTVGEEWSQDLHSSGRTDLKYSYRFVCDEHYYGEGCSVFCRPRDDAFGHFTCGERGEKVCNPGWKGPYCTEPI:第二步,在HS/PCs体外培养体系中加入rhDSL重组蛋白及早期造血因子,采用这两者结合扩增造血干细胞和祖细胞。
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