[发明专利]HPLC法同时测定蒲公英药材中绿原酸、咖啡酸含量的方法

摘要

本发明涉及一种HPLC法同时测定蒲公英药材中绿原酸、咖啡酸含量的方法，可有效解决以绿原酸和咖啡酸作为指标性成分，同时进行含量测定，对蒲公英药材的质量标准奠定基础的问题，实现本发明的具体技术方案是：分别制备供试品溶液和对照品溶液，用RP－HPLC法，梯度洗脱，流动相为甲醇—磷酸水，测定绿原酸、咖啡酸含量，本发明方法简便、可靠、迅速，灵敏度高，重现性好，回收率高，以绿原酸和咖啡酸作为指标性成分，为蒲公英药材质量标准的制定奠定了基础，提供了更科学的依据。

主权项

1、一种HPLC法同时测定蒲公英药材中绿原酸、咖啡酸含量的方法，是分别制备供试品溶液和对照品溶液，用RP-HPLC法测定绿原酸、咖啡酸含量，其特征是：色谱柱为AichromBond-AQ柱，250mm×4.6mm，5μm，流动相为甲醇-0.015％磷酸水，其中流动相A为甲醇，流动相B为体积浓度0.015％的磷酸水，采用梯度洗脱，0.01-20min时，流动相A∶流动相B的体积比为20％∶80％，即0.01min时，流动相A与流动相B的体积比为20％∶80％，保持到20min，在20-40min，流动相A∶流动相B的体积比为30％∶70％，即在20-40min时，流动相A与流动相B的体积比由初始时的20％∶80％逐渐改变到30％∶70％，流速为1.0ml/min，检测波长为323nm，柱温30℃～40℃；在测定绿原酸、咖啡酸含量前，利用流动相先对色谱柱进行平衡，流动相A与流动相B初始体积比为30％∶70％，在0-2min，流动相A与流动相B的体积比改变为20％∶80％，保持到22min，流速为1.0ml/min；供试品溶液和对照品溶液的制备方法为：取蒲公英药材粉末0.5g左右，加入体积浓度为5％甲酸的甲酸甲醇溶液10ml，称定重量，超声提取30min，取出放至18-25℃，加体积浓度为5％甲酸的甲酸甲醇溶液补足减失重量，过滤，取续滤液，过滤，得蒲公英药材供试品溶液；取咖啡酸对照品，加甲醇配成咖啡酸质量浓度为0.066mg/ml的咖啡酸溶液，过滤，即得咖啡酸对照品溶液；取绿原酸对照品，加甲醇配成绿原酸质量浓度为0.0784mg/ml的绿原酸溶液，过滤，即得绿原酸对照品溶液；称取蒲公英药材，分别加入0.0784mg/ml绿原酸对照品溶液1ml，0.066mg/ml咖啡酸对照品溶液2.5ml，即加入绿原酸对照品0.0784mg，咖啡酸对照品0.165mg，得混合对照品溶液。