[发明专利]猪精囊腺生物反应器小鼠暂态表达检测方法

摘要

本发明公开了一种猪精囊腺生物反应器表达特性研究的检测体系。技术方案利用构建的猪精囊腺生物反应器表达元件，在小鼠体内进行暂态表达，进行猪精囊腺生物反应器转基因构件的表达水平、组织特异性、表达产物活性研究，为真正的转基因猪精囊腺生物反应器研究提供实验依据。与同类技术相比，该发明具有经济、快速、实用的特点。

主权项

1、一种检测猪精囊腺生物反应器表达特性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)猪精浆蛋白基因调控区克隆：根据猪精浆蛋白II基因序列设计引物，以猪基因组模板，扩增猪精浆蛋白II基因5’和3’端侧翼区；(2)猪精囊腺生物反应器表达载体构建：将猪精浆蛋白II基因5’和3’端侧翼区亚克隆入改造过的pcDNA3.0载体，然后从商业化质粒pEGFP-N1中绿荧光蛋白基因表达盒切出，包含多聚腺苷酸化信号DNA，插入至猪精浆蛋白II基因5’和3’端侧翼区中间，构建成猪精囊腺生物反应器表达载体PSPII-EGFP；(3)暂态表达：将PSPII-EGFP重组质粒与基因转染剂PEI混合，将成年公鼠麻醉后，经尾静脉注射入体内；(4)表达检测：将公鼠杀死后取附性腺组织制作冰冻切片，在荧光显微镜下观察报告基因表达，并提取各组织总RNA和总蛋白，进行RNA和蛋白水平表达检测。