[发明专利]一种重组人血清白蛋白及其融合蛋白的分离纯化工艺

摘要

本发明提供了一种分离纯化目标蛋白重组人血清白蛋白及其融合蛋白的具通用性、高效性工艺流程。该方法包括将用无机盐培养基获得的含目标蛋白的基因工程酵母菌发酵上清液和使用无血清培养基获得的重组脊椎动物细胞培养液直接用一种耐高盐、高载量离子交换型亲和柱层析介质Capto MMC填料来分离纯化。这一纯化程序步骤简单、具独特性、低成本和易于产业化等特点。

主权项

1.一种分离纯化目标蛋白重组人血清白蛋白及与它形成的融合蛋白的程序，其特征在于，通过4个步骤来完成：(1)利用无机盐培养基获得的含高盐、高密度酵母菌发酵液经板框机过滤获得含目标蛋白的上清液加入适量活性炭；或利用无血清培养基获得的含目标蛋白的脊椎动物细胞培养液，经连续流离心机，去除活性炭或细胞和细胞碎片从而获得含目标蛋白的上清液；(2)从步骤(1)中获得的含目标蛋白上清液，直接上经平衡液-A平衡的含Capto-MMC介质的层析柱，上样后用平衡液再平衡。使用缓冲液-B将杂蛋白洗脱，缓冲液-C将目标蛋白洗脱，获得纯度达80％以上的目标蛋白；(3)由步骤(2)获得的目标蛋白可进一步经疏水层析填料(HIC)，优选地是丁基或苯基作为配基的疏水性介质的使用，可获得纯度达90％-95％的目标蛋白；(4)由步骤(2)获得的目标蛋白可进一步经离子交换层析填料，优选地是Q或DEAE Sepharose Fast Flow离子交换介质的进一步使用可保证获得纯度达95％以上的目标蛋白，而可作为蛋白药物原料。